Một Phương Pháp Real-Time Pcr Kép Mới Được Phát Triển Cho Salmonella Spp. Và Phát Hiện Listeria

1

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

Một phương pháp real-time PCR kép mới được phát triển

cho Salmonella spp.và phát hiện Listeria monocytogenes trong

các mẫu thực phẩm và môi trường

Nguyen Trung Kien

Một phương pháp real-time PCR kép mới được phát triển cho Salmonella spp. và phát hiện

Listeria monocytogenes trong các mẫu thực phẩm và môi trường

2

THÔNG TIN BÀI BÁO

Tên bài báo: A new real-time PCR developed method for Salmonella spp. and

Listeria monocytogenes detection in food and environmental samples

Tạm dịch: Phương pháp real-time PCR kép mới được phát triển cho Salmonella

spp. và phát hiện Listeria monocytogenes trong các mẫu thực phẩm và môi trường

Tác giả: Alejandro Garrido, María-José Chapela, Belén Román, Paula Fajardo,

Jorge Lago, Juan M. Vieites, Ana G. Cabado

Được đăng trên tạp chí: Food Control

Trang chủ tạp chí: www.elsevier.com/locate/foodcont

Ngày bài báo được chấp nhận: 20/06/2012

Một phương pháp real-time PCR kép mới được phát triển cho Salmonella spp. và phát hiện

Listeria monocytogenes trong các mẫu thực phẩm và môi trường

3

TÓM TẮT

Bất chấp những nỗ lực của các ngành công nghiệp, một số tác nhân gây bệnh từ

thực phẩm nổi tiếng như Salmonella spp. và Listeria monocytogenes, tiếp tục là một

thách thức đối với các tổ chức y tế và là mối đe dọa đối với người tiêu dùng. Mục đích

của nghiên cứu này là phát triển một phương pháp realtime PCR (qPCR) hoàn chỉnh,

nhanh chóng và đáng tin cậy để phát hiện đồng thời hai loại vi khuẩn này trong các mẫu

thực phẩm và môi trường, bao gồm cả môi trường tăng sinh đơn lẻ mới (TA10) cho cả

hai loại vi khuẩn. Môi trường TA10 đã được thay đổi (độ pH và nồng độ đệm) để tăng

cường sự phát triển đồng thời của cả hai mầm bệnh khi có số lượng lớn vi khuẩn cạnh

tranh. Ngoài ra, hai giao thức tách chiết DNA khác nhau cũng được so sánh. đạt được

hiệu quả qPCR trên 90%, bao gồm 5 bậc độ lớn. Phương pháp hoàn chỉnh đạt được giới

hạn phát hiện thấp (5 CFU/25g) và tất cả các thông số chất lượng của phương pháp trả về

giá trị trên 90%. Phương pháp qPCR hoàn chỉnh được áp dụng cho 95 mẫu tự nhiên bao

gồm nhiều loại thực phẩm chứng minh rằng phương pháp qPCR được mô tả, bao gồm

việc sử dụng một môi trường tăng sinh duy nhất, TA10 đã được sửa đổi, phù hợp để sàng

lọc đồng thời Salmonella spp. và L. monocytogenes trong các mẫu thực phẩm và môi

trường.

Một phương pháp real-time PCR kép mới được phát triển cho Salmonella spp. và phát hiện

Listeria monocytogenes trong các mẫu thực phẩm và môi trường

4

1. Giới thiệu

Các bệnh do thực phẩm là một vấn đề sức khỏe cộng đồng và đang có chiều hướng

gia tăng gây ảnh hưởng đến cả các nước phát triển và đang phát triển, thực phẩm và nước

bị ô nhiễm, là nguyên nhân chính gây ra bệnh tiêu chảy. Mặc dù tỷ lệ mắc bệnh toàn cầu

của chúng rất khó ước tính, nhưng nhìn chung đa số đều đồng ý rằng tỷ lệ dân số mắc các

bệnh do thực phẩm hàng năm có thể lên tới 30% ở các nước công nghiệp hóa và con số

này có thể còn tồi tệ hơn ở các nước đang phát triển (Germini, Masola, Carnevali, &

Marchelli, 2009). Nhằm giảm thiểu nguy cơ lây nhiễm cho người tiêu dùng, việc kiểm

soát vi sinh trong chuỗi thực phẩm đang được áp dụng ngày càng nhiều. Do đó, sự sẵn có

của các hệ thống xét nghiệm đáng tin cậy, nhanh chóng và được quốc tế chấp nhận để xác

định sự hiện có mặt của mầm bệnh từ thực phẩm ngày càng trở nên quan trọng đối với

các ngành nông nghiệp và thực phẩm, cũng như đối với quy định pháp lý về an toàn thực

phẩm (Malorny, Hoorfar , Bunge, & Helmuth, 2003) như đã nêu trong quy định 2073/05

và bản sửa đổi 1441/07 ((EC), 2005, 2007). Vi khuẩn gây bệnh thường hiện diện với số

lượng rất thấp nên sẽ gây khó khăn cho việc phục hồi các sinh vật cần xác định

(Kawasaki, Fratamico, Kamisaki-Horikoshi, và cộng sự., 2010).

Vào đầu những năm 1990, phản ứng chuỗi polymerase (PCR) được sử dụng để

xác định đơn giản các vi khuẩn thuần khiết hoặc các khuẩn lạc trên các đĩa thạch. Kể từ

đó, sự phát triển của các chế phẩm mẫu thích hợp cho PCR phát hiện vi khuẩn trong thực

phẩm hoặc môi trường tiền tăng sinh đã mở rộng rất nhiều (Rijpens & Herman, 2002) và

một số nghiên cứu xác nhận PCR đã báo cáo rằng phương pháp PCR là một trong những

phương pháp hứa hẹn nhất trong số các phương pháp các phương pháp vi sinh nhanh

chóng để phát hiện và xác định vi khuẩn trong nhiều loại mẫu (Myint, Johnson, Tablante,

& Heckert, 2006) như đã được chứng minh trước đây (Chapela và cộng sự, 2010;

Garrido và cộng sự, 2012). Các kỹ thuật dựa trên PCR như PCR kép, PCR phiên mã