Khảo sát thành phần hóa học và nghiên cứu quy trình sản xuất sản phẩm hỗ trợ giảm đường huyết từ lá cây cóc đỏ (lumnitzera littorea) trồng tại rừng ngập mặn Cần Giờ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BÁO CÁO TỔNG KẾT

ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN

KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ NGHIÊN CỨU QUY

TRÌNH SẢN XUẤT SẢN PHẨM HỖ TRỢ GIẢM ĐƯỜNG

HUYẾT TỪ LÁ CÂY CÓC ĐỎ (LUMNITZERA LITTOREA)

TRỒNG TẠI RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ

Mã số đề tài:

Bình Dương, 03/2019

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BÁO CÁO TỔNG KẾT

ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN

KHẢO SÁT THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ NGHIÊN CỨU QUY

TRÌNH SẢN XUẤT SẢN PHẨM HỖ TRỢ GIẢM ĐƯỜNG

HUYẾT TỪ LÁ CÂY CÓC ĐỎ (LUMNITZERA LITTOREA)

TRỒNG TẠI RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ

Mã số đề tài:

Chủ nhiệm đề tài: Lê Linh Ngọc

Khoa: Công nghệ sinh học

Các thành viên:

Người hướng dẫn: ThS. Nguyễn Thị Lệ Thủy

Bình Dương, 03/2019

Huỳnh Thị Kim Trinh

Nguyễn Thị Thủy

Bùi Thanh Tùng

Huỳnh Tấn Lộc

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ

THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

CỘNG HOÀ XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM

Độc lập - Tự do - Hạnh phúc

THÔNG TIN VỀ SINH VIÊN

CHỊU TRÁCH NHIỆM CHÍNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI

I. SƠ LƯỢC VỀ SINH VIÊN:

Họ và tên: LÊ LINH NGỌC

Sinh ngày: 25 tháng 06 năm 1997

Nơi sinh: Quảng Trị

Lớp: DH16TP01 Khóa: 16

Khoa: Công nghệ sinh học

Địa chỉ liên hệ: 12G, khu phố 4, phường Tân Phông, Biên Hòa, Đồng Nai

Điện thoại: 0934125256 Email:[email protected]

II. QUÁ TRÌNH HỌC TẬP (kê khai thành tích của sinh viên từ năm thứ 1 đến năm đang học):

* Năm thứ 1:

Ngành học: Công nghệ sinh học Khoa: Công nghệ sinh học

Kết quả xếp loại học tập: 2.84

Sơ lược thành tích: Khá

* Năm thứ 2:

Ngành học: Công nghệ sinh học Khoa: Công nghệ sinh học

Kết quả xếp loại học tập: 2.71

Sơ lược thành tích: Khá

Ngày tháng năm

Xác nhận của đơn vị

(ký tên và đóng dấu)

Sinh viên chịu trách nhiệm chính

thực hiện đề tài

Lê Linh Ngọc

Ảnh 4x6

MỤC LỤC

N MỤ TỪ V T TẮT ...............................................................................i

N MỤ N ...................................................................................................... ii

N MỤ ẢNG .................................................................................................... iii

DANH MỤ SƠ ĐỒ .....................................................................................................v

ĐẶT VẤN ĐỀ.................................................................................................................1

PHẦN I: TỔNG QUAN ................................................................................................3

1.1. TỔNG QUAN VỀ CHI LUMNITZERA..........................................................3

1.1.1. Phân loại ...............................................................................................................3

1.1.2. Đặc điểm hình thái................................................................................................3

1.1.3. Phân bố .................................................................................................................3

1.1.4. Giá trị kinh tế ........................................................................................................4

1.1.5. Tình hình nghiên cứu trong nước và ngoài nước .................................................6

1.2. BỆN Đ T O ĐƢỜNG..............................................................................8

1.2.1. Khái niệm..............................................................................................................8

1.2.2. Phân loại ...............................................................................................................8

1.2.3. Phương pháp điều trị.............................................................................................9

1.3. TỔNG QUAN VỀ ENZYME α - GLUCOSIDASE.........................................9

1.3.1. Enzyme α-glucosidase ..........................................................................................9

1.3.2. Cơ chế hoạt động của enzyme α – glucosidase ..................................................10

1.3.3. Tác nhân ức chế enzyme α – glucosidase...........................................................10

1.4. CÔNG NGHỆ BÀO CH VIÊN NANG CỨNG:..........................................10

1.4.1. Khái quát về thuốc viên nang .............................................................................10

1.4.2. Thành phần viên nang: .......................................................................................11

PHẦN II: VẬT LIỆU VÀ P ƢƠNG P P NG ÊN ỨU .................................12

2.1. VẬT LIỆU.........................................................................................................12

2.1.1. Đối tượng nghiên cứu .........................................................................................12

2.1.2. Địa điểm nghiên cứu...........................................................................................12

2.1.3. Hóa chất và thiết bị.............................................................................................12

2.2. PHƢƠNG P P NG ÊN ỨU ...................................................................13

2.2.1. Phương pháp thu thập mẫu .................................................................................13

2.2.2. Phương pháp phân lập các hợp chất ...................................................................13

2.2.3. Phương pháp xác định cấu trúc hóa học các hợp chất........................................13

2.2.4. Xác định hàm lượng polyphenol ........................................................................13

2.2.5. Xác định hàm lượng flavonoid. ..........................................................................14

2.2.6. Phương pháp xác định khả năng ức chế enzyme α- glucosidase .......................14

2.2.7. Phương pháp xác định khả năng kháng oxy hóa ................................................15

2.2.8. Phương pháp khảo sát đặc tính của khối bột thuốc và đo độ rã của viên nang.16

2.3. NỘI DUNG NGHIÊN CỨU.............................................................................18

2.3.1. Sơ đồ nghiên cứu ................................................................................................18

2.3.2. Khảo sát tiêu chuẩn chất lượng lá Cóc đỏ ..........................................................18

2.3.3. Quy trình cô lập hợp chất từ hợp chất tự nhiên có hoạt tính sinh học................22

2.3.4. Quy tr nh ào chế thuốc viên nang cứng từ ược liệu .......................................26

2.3.5. Xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm cho viên nang chứa cao Cóc đỏ: ................28

2.3.6. QUY TRÌNH SẢN XUẤT TRÀ HÒA TAN DỰ KIẾN....................................29

2.3.7. NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT TRÀ HÒA TAN ...........................30

2.3.8. NGHIÊN CỨU CHẤT LƯỢNG SẢN PHẨM TOÀN DIỆN............................34

PHẦN III: K T QUẢ VÀ THẢO LUẬN .................................................................37

3.1. K T QUẢ KHẢO SÁT TIÊU CHUẨN CHẤT LƢỢNG L Ó ĐỎ .....37

3.1.1. Kết quả thành phần hóa lý của nguyên liệu........................................................37

3.1.2. Kết quả định lượng hợp chất có hoạt tính sinh học trong nguyên liệu...............37

3.1.3. Kết quả khảo sát khả năng ức chế enzyme α-glucosidase..................................38

3.1.4. Kết quả khảo sát khả năng kháng oxy hóa .........................................................39

3.2. CÔ LẬP HỢP CHẤT TỪ O P ÂN ĐOẠN C .........................................40

3.2.1. Biện luận cấu trúc của hợp chất LE01................................................................40

3.2.2. Biện luận cấu trúc của hợp chất LE02................................................................41

3.2.3. Biện luận cấu trúc của hợp chất LE03................................................................43

3.2.4. Biện luận cấu trúc của hợp chất LE04................................................................44

3.2.5. Biện luận cấu trúc của hợp chất LE05................................................................45

3.2.6. Biện luận cấu trúc của hợp chất LE06................................................................46

3.3. K T QUẢ NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG ỨC CH ENZYME α￾GLUCOSIDASE CỦA CÁC CHẤT CÔ LẬP ĐƢỢC..................................48

3.4. K T QUẢ KHẢO SÁT CÔNG THỨC VIÊN NANG CHỨA CAO CÓC

ĐỎ ......................................................................................................................49

3.4.1. Lựa chọn hàm lượng cao Cóc đỏ........................................................................49

3.4.2. Lựa chọn hàm lượng tá ược hút........................................................................49

3.4.3. Góc chảy .............................................................................................................50

3.4.4. Tỷ trọng biểu kiến...............................................................................................50

3.4.5. Phân bố cỡ hạt ....................................................................................................50

3.4.6. Độ tan rã .............................................................................................................50

3.4.7. Xây dựng tiêu chuẩn kỹ thuật viên nang chứa cao Cóc đỏ ................................50

3.5. K T QUẢ NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH SẢN XUẤT TRÀ HÒA TAN ....51

3.5.1. Kết quả khảo sát sự ảnh hưởng của quá tr nh sao đến chất lượng trà ................51

3.5.2. Kết quả khảo sát các ảnh hưởng đến quá trình trích ly ......................................53

3.5.3. Kết quả khảo sát nồng độ chất tan dịch cần đạt sau cô đặc................................56

3.5.4. Kết quả chỉ tiêu cảm quan sản phẩm..................................................................57

3.5.5. Kết quả khảo sát hoạt tính sinh học trên trà thành phẩm....................................59

PHẦN IV: K T LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ......................................................................61

TÀI LIỆU THAM KHẢO...........................................................................................65

PHỤ LỤC .......................................................................................................................I

i

N MỤ TỪ V T TẮT

CC Phương pháp sắc ký

d Mũi đôi

DMSO DiMethyl SulfOxide

EA Ethyl Acetate (EtOAc)

HR-ESI-MS Phổ khối lượng phân tử cao

J Hằng số ghép

m Mũi đa

Me Methyl

NMR Phổ cộng hưởng từ hạt nhân

ppm Part Per Million

TLC Sắc ký bản mỏng

Rf Hệ số lưu

s Mũi đơn

t Mũi a

UV Phổ hồng ngoại

oC Độ C

DĐVN Dược điển Việt Nam

tvđ Tỷ trọng trước va đập

svđ Tỷ trọng sau va đập

AOAC Hiệp hội các nhà hoá học phân tích quốc tế

(Association of Official Analytical Chemists)

ii

N MỤC HÌNH

Hình 1.1: Hoa của Cóc đỏ ...............................................................................................5

Hình 1.2: Hoa của Cóc trắng ...........................................................................................5

Hình 1.3: Hoa của Cóc trắng ...........................................................................................5

Hình 1.4: Hoa của Cóc đỏ ...............................................................................................5

Hình 1.5: Quả của hai loài...............................................................................................5

Hình 1.6: Hoa của hai loài...............................................................................................5

Hình 1.7: Cấu trúc hóa học của các hợp chất từ chi Lumnitzera racemosa ....................7

Hình 2.1: Phản ứng thủy phân p-nitrophenyl-α-D-glucopyranosi ởi ........................15

H nh 2.2: Cơ chế kháng oxy hóa ...................................................................................16

Hình 2.3: Phương pháp xác định góc nghỉ của bột, hạt thuốc.......................................17

Hình 3.1: Công thức cấu tạo của Myricetin (LE01)......................................................40

Hình 3.2: Công thức cấu tạo của Quercetin (LE02 .......................................................42

Hình 3.3: Hình công thức cấu tạo của Quercitrin (LE03).............................................43

Hình 3.4: Công thức cấu tạo của Betulin (LE04)..........................................................45

Hình 3.5: Công thức cấu tạo của Betulinic acid (LE05) ...............................................46

Hình 3.6: Công thức cấu tạo của Lupeol (LE06) ..........................................................46

iii

N MỤC BẢNG

Bảng 2.1: Phương pháp khảo sát thành phần và tính chất nguyên liệu........................18

Bảng 2.2: Bố trí thí nghiệm nghiên cứu khả năng ức chế hoạt tính của .......................20

Bảng 2.3: Bố trí thí nghiệm khảo sát khả năng kháng oxy hóa từ cao chiết................21

Bảng 2.4: Bố trí thí nghiệm nghiên cứu khả năng ức chế hoạt tính của .......................25

Bảng 2.5: Công thức thiết kế tối ưu viên nang chứa cao Cóc Đỏ. ................................27

Bảng 2.6: Bảng ố trí thí nghiệm khảo sát sự ảnh hưởng của quá tr nh sao.................30

Bảng 2.7: Chỉ tiêu đánh giá cảm quan về nhiệt độ và thời gian sao đến chất lượng trà31

Bảng 2.8: Bảng ố trí thí nghiệm khảo sát tỉ lệ nguyên liệu: nước ...............................31

Bảng 2.9: Bảng ố trí thí nghiệm khảo sát nhiệt độ ......................................................32

Bảng 2.10: Bảng ố trí thí nghiệm khảo sát thời gian trích ly ......................................33

Bảng 2.11: Bảng ố trí thí nghiệm khảo sát nồng độ chất tan ịch cần đạt sau cô đặc 33

Bảng 2.12: Bảng điểm cảm quan của ịch trà theo nồng độ chất tan ịch sau cô đặc..34

Bảng 2.13: Bảng đánh giá chất lượng mức sản phẩm...................................................34

Bảng 3.1: Kết quả khảo sát thành phần và tính chất của nguyên liệu...........................37

Bảng 3.2: Kết quả định lượng hợp chất có hoạt tính sinh học ......................................38

Bảng 3.3: Kết quả khả năng ức chế enzyme α-glucosi ase của cao chiết ....................38

Bảng 3.4: Kết quả khảo sát khả năng kháng oxy hóa của cao cồn................................39

Bảng 3.5: Dữ liệu phổ NMR của hợp chất LE01 và myricetin.....................................41

Bảng 3.6: Dữ liệu phổ NMR của hợp chất LE02 và quercetin .....................................42

Bảng 3.7: Dữ liệu phổ NMR của hợp chất LE03 và quercitrin.....................................44

Bảng 3.8: Dữ liệu phổ

1H-NMR của hợp chất LE04, LE05 và LE06...........................47

Bảng 3.9: Dữ liệu phổ

1H-NMR của hợp chất LE04, LE05 và LE06...........................47

Bảng 3.10: Kết quả hoạt tính chống lại α-glucosidase của các hợp chất cô lập ...........48

Bảng 3.11: Công thức thiết kế tối ưu viên nang............................................................49

Bảng 3.12: Độ ẩm công thức tối ưu...............................................................................49

Bảng 3.13: Độ ẩm các công thức tối ưu ........................................................................49

Bảng 3.14: Góc chảy công thức viên nang tối ưu được khảo sát..................................50

Bảng 3.15: Tỷ trọng biểu kiến của các công thức khảo sát...........................................50

Bảng 3.16: Phân bố cỡ hạt của các công thức khảo sát.................................................50

Bảng 3.17: Kết quả đánh giá cảm quan quá tr nh sao đến chất lượng trà .....................52

Bảng 3.18: Kết quả quá tr nh trích ly của nghiệm thức nguyên liêu: nước ..................53

Bảng 3. 19: Ảnh hưởng của nhiệt độ trích ly đến hiệu suất thu hồi hàm lượng chất khô

trong ịch chiết lá Cóc đỏ..............................................................................................54

Bảng 3.20: Kết quả khảo sát ảnh hưởng của thời gian trích ly .....................................55