Thí nghiệm nuôi cấy mô và tế bào thực vật - Bài 7 pot

http://www.ebook.edu.vn 185

Bài 7

Chuyển gen thông qua

Agrobacterium tumefaciens

I. Mục đích và yêu cầu

Các thực vật chuyển gen đã được tạo ra bằng nhiều kỹ thuật khác

nhau. Có hai phương thức chính:

- Chuyển gen trực tiếp: bắn gen, xung điện, vi tiêm, siêu âm,

silicon carbide, thông qua ống phấn, điện di ...

- Chuyển gen gián tiếp (nhờ vi sinh vật): Agrobacterium

tumefaciens.

Phương pháp được sử dụng thông dụng và ít tốn kém hơn cả là

chuyển gen gián tiếp thông qua Agrobacterium. Agrobacterium

tumefaciens là một loài vi khuẩn Gram âm có trong đất, thường được sử

dụng để tiến hành biến nạp di truyền trên đối tượng thực vật. Đoạn DNA

muốn chuyển vào một cây nào đó có thể được thao tác dễ dàng trên E. coli

và sau đó chuyển trở lại vào Agrobacterium. Việc chuyển gen vào thực vật

qua Agrobacterium đã thực hiện thành công trên nhiều loại cây: thuốc lá,

đậu tương, các cây họ đậu nhiệt đới, bông cải, khoai tây.

II. Dụng cụ, thiết bị, hóa chất

1. Dụng cụ

- Bình tam giác (250 mL), ống nghiệm có nắp vặn

- Giấy thấm vô trùng

- Forceps, kéo, dao mổ

- Que cấy vi sinh

- Đĩa petri (plastic và thủy tinh) vô trùng

- Giấy parafilm

- Giấy nhôm

- Tube eppendorf (1,5-2 mL)

- Cốc chịu nhiệt, ống đong, micropipette

2. Thiết bị

- Nồi khử trùng