Thí nghiệm nuôi cấy mô và tế bào thực vật - Bài 6 pot

http://www.ebook.edu.vn 181

Bài 6

Nuôi cấy protoplast

I. Mục đích và yêu cầu

Kỹ thuật protoplast phát triển mạnh từ sau công trình của Takebe

(1971) khi tái sinh cây hoàn chỉnh từ protoplast của lá cây thuốc lá. Có ba

phương thức phân lập protoplast, đó là:

- Cơ học (không dùng các enzyme)

- Sử dụng ezyme tuần tự (xử lý qua hai bước)

- Sử dụng hỗn hợp enzyme (xử lý đồng thời)

Tùy theo đối tượng và từng loại mô mà thay đổi nồng độ của các

enzyme cho thích hợp. Vì proplast thực chất là tế bào trần không có thành

cho nên có thể tách được từ nhiều nguồn khác nhau như các bộ phận của

cây (lá, rễ, hạt phấn), mô sẹo, tế bào đơn...

Protoplast thực vật có ba ứng dụng chính sau:

- Chọn dòng tế bào biến dị soma.

- Dung hợp protoplast để lai vô tính tế bào thực vật.

- Biến nạp di truyền: đưa các cơ quan tử, virus và DNA ngoại lai

vào tế bào thực vật.

II. Dụng cụ, thiết bị, hóa chất

1. Dụng cụ

- Bình tam giác (100 mL), đĩa petri nhựa đã vô trùng (disposable)

- Giấy thấm vô trùng

- Forceps, kéo, dao mổ

- Đĩa petri thủy tinh vô trùng

- Giấy parafilm, giấy nhôm

- Tube ly tâm loại 15 mL

- Lưới lọc có đường kính lỗ lọc 65µm

- Cốc chịu nhiệt, ống đong, micropipette

2. Thiết bị

- Nồi khử trùng