Giáo trình DNA tái tổ hợp part 3 ppsx

Công nghệ DNA tái tổ hợp 9

- Hoạt tính exonuclease 3’ 5’. E. coli cắt

các chuỗi nucleotide ở các đầu tự do của DNA, xúc tác cho sự thoái biến bậc

thang từ đầu 3’ của cả DNA sợi đôi và sợi đơn khi không có dNTPs. Trong

trường hợp có dNTPs, hoạt tính exonuclease trên sợi đôi sẽ bị ức chế bởi

hoạt tính polymerase. Trong quá trình tổng hợp DNA, hoạt tính exonuclease

thực hiện chức năng đọc sửa (proofreading) bằng cách cắt bỏ những

nucleotide lắp ráp sai.

- nuclease 5’ 3’. E. coli

.

Cơ chất

5’ 3’

DNA polymerase

DNAOH + ndNTP DNA-(pdN)n + nPPi

DNA

DNA

mang nhóm 3’-OH

3’ 5’

Exonuclease

dsDNA ho

5’

pNOH

DNA sợi đơn hoặc sợi

đôi có đầu 3’-OH

5’ 3’

Exonuclease

dsDNA 5’

pNOH + 5’

pN(pN)npNOH + ssDNA

hoặc thể

lai RNA:DNA

-

làm mẫu dò .

.

.

1. E. coli

3’

5’

enzyme

Mg2+

enzyme

Mg2+

enzyme

Mg2+