Giáo trình DNA tái tổ hợp part 2 pdf

Công nghệ DNA tái tổ hợp 193

ở 40-65oC hoặc hơn và tổng hợp mạch mới nhờ DNA polymerase chịu nhiệt

(Taq polymerase) ở 70-72oC. PCR có ứng dụng rộng rãi trong chẩn đoán y

học, phân tích sự đa dạng sinh học, chọn giống và trong nhiều lĩnh vực

khác.

Nhà khoa học Mỹ (Tiến sĩ Mullis) người phát minh ra kỹ thuật PCR

đã nhận giải Nobel năm 1993. Cùng chia sẻ Giải Nobel với Mullis là Smith

(Canada) do có những đóng góp mang tính nền tảng cho việc gây đột biến

điểm định hướng, dựa trên các oligonucleotide và việc phát triển chúng

trong các nghiên cứu protein.

Phân tích trình tự gen (gene sequencing). Là kỹ thuật xác định trình

tự theo cấu trúc bậc một của chuỗi các nucleotide trong một phân tử nucleic

acid. Phân tích trình tự của DNA có các phương pháp hóa học của Maxam￾Gilbert và phương pháp enzyme của Sanger. Trong những năm gần đây,

một số phương pháp xác định trình tự mới nhờ sự hỗ trợ của máy tính đã

xuất hiện. Bên cạnh kỹ thuật thông thường sử dụng các polyacrylamide gel

để phân ly các phân tử DNA có độ dài khác nhau, các kỹ thuật mới liên

quan đến phát hiện huỳnh quang của các nucleotide được đánh dấu, phân

tích trình tự DNA bằng khối phổ, điện di mao dẫn hoặc lai với các đoạn

oligonucleotide được tổng hợp nhân tạo cũng đã ra đời.

Năm 1980, Sanger (Anh) và Gilbert (Mỹ) đã được trao giải Nobel do

đã có những đóng góp quan trọng về phương pháp xác định trình tự các

nucleotide trong phân tử DNA. Đóng góp này là mốc lịch sử to lớn trong

sinh học phân tử, là nguyên lý của tất cả các máy xác định trình tự DNA tự

động đang sử dụng hiện nay trên khắp thế giới.

Phần cuối (telomere). Đoạn cuối, phần cuối của một nhiễm sắc thể

thẳng của eukaryote, bao gồm những trình tự DNA ngắn được lặp lại nhiều

lần.

Phần tâm (centromere). Phần co thắt được thấy trên nhiễm sắc thể ở

kỳ giữa, đó là nơi hai nhiễm sắc tử đính với nhau.

Phiên mã (transcription). Là quá trình được xúc tác bởi enzyme

phiên mã RNA polymerase để tổng hợp mRNA từ khuôn mẫu DNA.

Phiên mã ngược (reverse transcription). Quá trình tổng hợp DNA

từ khuôn mẫu mRNA nhờ enzyme phiên mã ngược (reverse transcriptase).