Thư viện tri thức trực tuyến
Kho tài liệu với 50,000+ tài liệu học thuật
© 2023 Siêu thị PDF - Kho tài liệu học thuật hàng đầu Việt Nam
Tuyển Chọn Vi Khuẩn Có Khả Năng Sinh Tổng Hợp Các Enzyme Phân Giải Polysaccharide
Nội dung xem thử
Mô tả chi tiết
i
LỜI CẢM ƠN
Để hoàn thành đề tài nghiên cứu khoa học này, trƣớc hết tôi xin gửi đến
cô - TS nguyễn Nhƣ Ngọc, TS. Trần Thị Thu Lan lời cảm ơn sâu sắc, ngƣời đã
giúp đỡ tận tình hƣớng dẫn và theo dõi sát sao tôi trong quá trình hoàn thiện
nghiên cứu này.
Tôi cũng xin gửi đến nhà trƣờng, quý thầy, cô giáo trong viện Công nghệ
sinh học vàbộ môn Vi sinh - Hóa sinh lời cảm ơn chân thành nhất vì đã tạo cho
tôi có cơ hội đƣợc thực hiện đề tài, thể hiện sự sáng tạo của mình tại nơi mà tôi
yêu thích, để tôi có cơ hội áp dụng những kiến thức mà các thầy cô giáo đã
truyền đạt.
Thông qua quá trình thực hiện để tài, tôi đã học hỏi đƣợc nhiều điều và rút
ra cho mình nhiều kinh nghiệm quý báu để giúp ích cho công việc sau này của
bản thân. Vì kiến thức bản thân còn hạn chế, trong quá trình thực hiện, hoàn
thiện đề tài này không tránh khỏi những sai sót, kính mong nhận đƣợc những ý
kiến đóng góp từ các thầy, cô.
Sinh viên thực hiện
Lê Thị Huệ
ii
MỤC LỤC
LỜI CẢM ƠN ........................................................................................................i
MỤC LỤC.............................................................................................................ii
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT .....................................................................iv
DANH MỤC BẢNG............................................................................................. v
DANH MỤC HÌNH ............................................................................................. vi
ĐẶT VẤN ĐỀ....................................................................................................... 1
CHƢƠNG I.TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU ........................................ 3
1.1.Tổng quan về polysacharide............................................................................ 3
1.1.1. Cấu trúc polysaccharide .............................................................................. 3
1.1.2. Ứng dụng của polysaccharide ..................................................................... 6
1.1.3. Các enzyme phân giải polysaccharide ........................................................ 7
1.1.4. Vi sinh vật phân giải polysaccharide ........................................................ 12
CHƢƠNG II: MỤC TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
............................................................................................................................. 15
2.1. Mục tiêu........................................................................................................ 15
2.2. Nội dung nghiên cứu.................................................................................... 15
2.3. Vật liệu và phƣơng pháp nghiên cứu. .......................................................... 15
2.3.1. Vật liệu ...................................................................................................... 15
2.3.2. Hóa chất..................................................................................................... 15
2.3.3. Thiết bị, dụng cụ........................................................................................ 16
2.3.4. Môi trƣờng sử dụng trong nghiên cứu ...................................................... 17
2.4. Phƣơng pháp nghiên cứu.............................................................................. 17
2.4.1. Phƣơng pháp thu nhận mẫu....................................................................... 17
2.4.2. Phân lập vi khuẩn thuần khiết................................................................... 18
2.4.3. Tuyển chọn các chủng có khả năng phân giải polysaccharide mạnh. ...... 18
2.4.4. Phƣơng pháp xác định đặc tính sinh hóa của chủng tuyển chọn. ............. 25
CHƢƠNG III. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN................................................... 29
3.1. Kết quả phân lập các chủng vi khuẩn có khả năng phân giải polysaccharide
............................................................................................................................. 29
3.2: Tuyển chọn các chủng có khả năng phân giải polysaccharide mạnh. ......... 30
iii
3.2.1. Tuyển chọn dựa vào định tính................................................................... 30
3.2.2. Tuyển chọn dựa vào xác định hàm lƣợng đƣờng khử bằng phƣơng pháp
DNS..................................................................................................................... 35
3.2.3.Tuyển chọn các chủng có hoạt độ của enzyme cellulase, amylase,
pectinase. ............................................................................................................. 39
3.3. Một số đặc điểm hình thái, sinh lý, sinh hóa của hai chủng vi khuẩn TA và CM.... 39
3.3.1. Đặc điểm hình thái của khuẩn lạc ............................................................ 39
3.3.2. Kết quả nhuộm gram................................................................................. 40
3.4. Xác định đặc tính sinh hóa .......................................................................... 41
3.4.1. Khả năng lên men các loại đƣờng............................................................. 41
3.4.2 . Kết quả phản ứng MR và phản ứng VP ................................................... 43
3.4.3. Phản ứng catalase, khử nitrate, citrate, thử nghiệm tính di động.............. 43
CHƢƠNG IV: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ.................................................... 47
4.1. Kết luận ........................................................................................................ 47
4.2.Kiến nghị....................................................................................................... 47
TÀI LIỆU THAM KHẢO
PHỤ LỤC
iv
DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT
TT Chữ viết tắt Ký hiệu
1 Vi sinh vật VSV
2 Microlit µl
3 Lỗ thạch LT
4 Optical density - mật độ quang OD
5 Môi trƣờng cơ bản MTCB
6 Môi trƣờng tối ƣu MTTƢ
7 Môi trƣờng nuôi cấy MTNC
8 35 – dinitrosalicylic DNS
9 Cellobiohydrolase CBH
10 Micromet µm
11 Dalton DA
12 Vòng /phút v/p
13 Môi trƣờng thích hợp MTTH
14 Cellobiohydrolase CBH
15 Endo glucannase EG
16 Carboxyl methylcellulose CMC
17 B – glucanase BG
18 Phản ứng p/ứ
19 Aspergillus niger A.nige
20 Kilodalton KDa
21 Isoelectrics point Ip
22 Microlit µl
v
DANH MỤC BẢNG
Bảng 2.1: Một số chất sử dụng trong nghiên cứu ............................................... 15
Bảng 2.2: Một số thuốc thử sử dụng trong nghiên cứu....................................... 16
Bảng 2.3: Các thiết bị sử dụng trong thí nghiệm ................................................ 16
Bảng 2.4: Danh sách môi trƣờng sử dụng và thành phần ................................... 17
Bảng 2.5: Trị số OD540 nm đo đƣợc ở các nồng độ đƣờng glucose khác nhau khi
phản ứng với thuốc thử DNS .............................................................................. 21
Bảng 2.6: Trị số OD575 nm đo đƣợc ở các nồng độ đƣờng monogalacturonan
khác nhau khi phản ứng với thuốc thử DNS....................................................... 24
Bảng 3.1: Đặc điểm hình thái của các chủng vi khuẩn phân lập ........................ 29
Bảng 3.2. Đƣờng kính vòng phân giảicellulose của các chủng vi khuẩn ........... 31
Bảng 3.3: Đƣờng kính vòng phân giải tinh bột của các chủng vi khuẩn........... 32
Bảng 3.4: Đƣờng kính vòng phân giải pectin của các chủng vi khuẩn............... 34
Bảng 3.5: Kết quảxác định khả năng phân giải CMC của các chủng vi khuẩn.. 36
Bảng 3.6: Kết quả xác định khả năng phân giải tinh bột của các chủng vi khuẩn
............................................................................................................................. 37
Bảng 3.7: Kết quả xác định khả năng phân giải pectin của các chủng VSV...... 38
Bảng 3.8: Kết quả tuyển chọn các chủng có hoạt độ của enzyme cellulase,
amylase, pectinase............................................................................................... 39
Bảng 3.9: Đặc điểm hình thái khuẩn lạccủa hai chủng vi khuẩn CM và TA ..... 40
Bảng 3.10: Kết quả nhuộm gram các chủng vi khuẩn ........................................ 40
Bảng 3.11: Tổng kết các đặc tính sinh hóa của chủng TA và CM ..................... 41
Bảng 3.12: Phản ứng sinh hóa của vi khuẩn Bacillus subtilis. ........................... 46
vi
DANH MỤC HÌNH
Hình 1.1: Cấu trúc amylose................................................................................... 4
Hình 1.2: Hạt tinh bột trong lục lạp amylose........................................................ 5
Hình 1.3: Cấu trúc amylopectin ............................................................................ 5
Hình 1.4: Cấu trúc cellulose.................................................................................. 6
Hình 1.5: Cấu trúc pectin ...................................................................................... 6
Hình 1.6: Sơ đồ hoạt động của các enzyme them gia thủy phân hoàn toàn
cellulose. Mũi tên chỉ vị trí phân cắt của mỗi enzyme.......................................... 8
Hình 1.7: Quá trình thủy phân tinh bột của enzyme amylase............................ 10
Hình 1.8: Cơ chế tác động của pectinase vào phân tử pectin ............................. 11
Hình 2.1. Đồ thị đƣờng chuẩn glucose................................................................ 21
Hình 2.2: Đồ thị đƣờng chuẩn glacturonic.......................................................... 24
Hình 3.1. Hình ảnh khuẩn lạc sau 1 ngày nuôi cấy của một số chủng phân lập
đƣợc..................................................................................................................... 30
Hình3.2: Hình ảnh vòng phân giải CMC của các chủng C1; C8; TA; H2, CM,
L4......................................................................................................................... 31
Hình 3.4: Hình ảnh vòng phân giải pectin của các chủng có hoạt tính: H2, C8,
CM, L4, TA......................................................................................................... 34
Hình 3.5: Hình ảnh thử enzyme cellulase với thuốc thử DNS............................ 36
Hình 3.6: Hình ảnh thử enzyme amylase với thuốc thử DNS ............................ 37
Hình 3.7: Hình ảnh thử enzyme pectinase với thuốc thử DNS........................... 38
Hình 3.8: Khả năng phân giải các loại đƣờng của chủng CM............................ 41
Hình 3.9:Khả năng phân giải các loại đƣờng của chủng TA.............................. 42
Hình 3.10:Kết quả phản ứng MR và phản ứng VP............................................. 43
Hình 3.11: Kết quả phản ứng hoạt hóa catalase.................................................. 43
Hình 3.12: kết quả phản ứng khử nitrate............................................................. 44
Hình 3.13: Kết quả phản ứng citrate ................................................................... 44
Hình 3.14: Kết quả thử nghiệm tính di động ...................................................... 45