Nghiên cứu trình tự gen mã hóa enzyme polyphenol odidase ở một số giống chè đặc sản trồng ở Thái Nguyên

i

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC

PHẠM HỒNG ĐIỆP

NGHIÊN CỨU TRÌNH TỰ GEN MÃ HÓA

ENZYME POLYPHENOL OXIDASE Ở MỘT SỐ

GIỐNG CHÈ ĐẶC SẢN TRỒNG Ở THÁI NGUYÊN

LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC

THÁI NGUYÊN - NĂM 2014

ii

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC

PHẠM HỒNG ĐIỆP

NGHIÊN CỨU TRÌNH TỰ GEN MÃ HÓA

ENZYME POLYPHENOL OXIDASE Ở MỘT SỐ

GIỐNG CHÈ ĐẶC SẢN TRỒNG Ở THÁI NGUYÊN

Chuyên ngành: Công nghệ sinh học

Mã số: 60.42.02.01

LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Người hướng dẫn khoa học: TS. HOÀNG THỊ THU YẾN

THÁI NGUYÊN - NĂM 2014

iii

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

LỜI CAM ĐOAN

Tôi cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi.

Các số liệu, kết quả nêu trong luận văn là trung thực và chưa từng được

ai công bố trong bất kỳ công trình nào khác.

Tác giả

Phạm Hồng Điệp

iv

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin bày tỏ sự biết ơn sâu sắc tới TS. Hoàng Thị Thu Yến - Giảng

viên Khoa Khoa học Sự sống - Trường Đại học Khoa học, là giáo viên hướng

dẫn tôi đã tận tình hướng dẫn, truyền đạt những kiến thức và kinh nghiệm quý

báu suốt thời gian qua để tôi hoàn thành luận văn này.

Tôi xin cảm ơn cán bộ Phòng thí nghiệm Khoa Khoa học Sự sống -

Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên, Viện Khoa học sự sống -

Đại học Thái Nguyên, Viện nghiên cứu hệ gen - Viện Hàn lâm Khoa học và

Công nghệ Việt Nam đã nhiệt tình giúp đỡ và tạo mọi điều kiện thuận lợi

trong quá trình thực hiện luận văn.

Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các hộ gia đình thuộc vùng

chè Tân Cương - Thành phố Thái Nguyên đã giúp đỡ tôi trong thời gian thu

thập mẫu vật nghiên cứu làm luận văn.

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới toàn thể gia đình, cảm ơn bạn

bè, đồng nghiệp và nhóm nghiên cứu di truyền phân tử đã luôn ủng hộ, động

viên tôi trong suốt thời gian qua.

Thái Nguyên, tháng 9 năm 2014.

Tác giả

Phạm Hồng Điệp

v

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN......................................................................................... i

LỜI CẢM ƠN............................................................................................... ii

MỤC LỤC.................................................................................................... iii

NHỮNG TỪ VIẾT TẮT............................................................................. v

DANH MỤC CÁC BẢNG........................................................................... vii

DANH MỤC CÁC HÌNH............................................................................ viii

MỞ ĐẦU....................................................................................................... 1

1. Lý do chọn đề tài....................................................................................... 1

2. Mục tiêu nghiên cứu.................................................................................. 2

3. Nội dung nghiên cứu.................................................................................. 3

Chƣơng 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU......................................................... 4

1.1. SƠ LƢỢC VỀ CÂY CHÈ.................................................................... 4

1.1.1. Nguồn gốc, lịch sử phát triển của cây chè.......................................... 4

1.1.2. Đặc điểm sinh học của cây chè............................................................ 5

1.1.3. Giá trị của cây chè............................................................................... 9

1.1.4. Tình hình sản xuất chè trên thế giới và ở Việt Nam............................ 10

1.1.5. Tình hình chế biến chè ở Việt Nam..................................................... 12

1.1.6. Đặc điểm một số giống chè trồng ở Thái Nguyên.............................. 14

1.2. KHÁI QUÁT VỀ POLYPHENOL OXIDASE………………………. 17

1.2.1. Vai trò của Polyphenol oxidase (PPO)………………………………… 17

1.2.2. PPO ở chè…………………………………………………………………. 19

1.2.3. Tình hình nghiên cứu PPO ở chè trên thế giới và ở Việt Nam………….. 19

Chƣơng 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU................. 22

2.1. VẬT LIỆU............................................................................................. 22

2.1.1. Nguyên liệu nghiên cứu....................................................................... 22

2.1.2. Hóa chất thiết bị................................................................................... 23

vi

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU........................................................ 23

2.2.1. Phương pháp tách chiết DNA tổng số................................................. 23

2.2.2. Phương pháp điện di trên gel agarose.................................................. 25

2.2.3. Phương pháp nhân gen bằng PCR....................................................... 25

2.2.4. Phương pháp tinh sạch sản phẩm PCR ............................................... 27

2.2.5. Tách dòng gen mã hóa PPO……………….………………..................... 28

2.2.6. Phương pháp xác định trình tự nucleotide........................................... 32

2.2.7. Phương pháp xử lý số liệu................................................................... 32

Chƣơng 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN.................................................. 33

3.1. TÁCH DNA TỔNG SỐ TỔNG SỐ TỪ CÁC MẪU CHÈ

NGHIÊN CỨU.............................................................................................

33

3.2. NHÂN GEN PPO Ở CÁC MẪU CHÈ NGHIÊN CỨU..................... 34

3.3. TÁCH DÒNG GEN PPO TỪ CÁC GIỐNG CHÈ NGHIÊN CỨU. 35

3.4. PHÂN TÍCH TRÌNH TỰ GEN PPO TỪ 3 GIỐNG NGHIÊN

CỨU...............................................................................................................

37

3.5. PHÂN TÍCH, SO SÁNH TRÌNH TỰ GEN PPO 3 GIỐNG CHÈ

NGHIÊN CỨU…………………………………………………………….

40

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……………………………………………. 45

TÀI LIỆU THAM KHẢO........................................................................... 46