Nghiên cứu chuyển gen mã hóa Enzyme Columbamine O-Methyltransferase (CoOMT) vào cây thuốc lá (Nicotiana Tabacum L.)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM

–––––––––––––––––––––

XAYKHAM THIPPHAVONG

NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN MÃ HÓA ENZYME

COLUMBAMINE O-METHYLTRANSFERASE (CoOMT)

VÀO CÂY THUỐC LÁ (NICOTIANA TABACUM L.)

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

THÁI NGUYÊN - 2021

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM

–––––––––––––––––––––

XAYKHAM THIPPHAVONG

NGHIÊN CỨU CHUYỂN GEN MÃ HÓA ENZYME

COLUMBAMINE O-METHYLTRANSFERASE (CoOMT)

VÀO CÂY THUỐC LÁ (NICOTIANA TABACUM L.)

Ngành: DI TRUYỀN HỌC

Mã số: 8420121

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

Ngƣời hƣớng dẫn khoa học : TS. PHẠM THỊ THANH NHÀN

THÁI NGUYÊN - 2021

i

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan luận văn: “Nghiên cứu chuyển gen mã hóa enzyme

columbamine o-methyltransferase (CoOMT) vào cây thuốc lá (Nicotiana

tabacum L.)” là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Tôi đã tự tiến hành các

bước thí nghiệm, thu kết quả và viết thành luận văn dưới sự hướng dẫn trực

tiếp của TS. Phạm Thị Thanh Nhàn. Mọi kết quả đã thu được là trung thực,

không sao chép từ kết quả nghiên cứu khác. Tất cả những tham khảo và kế

thừa đều được trích dẫn đầy đủ.

Thái Nguyên, tháng 7 năm 2021

Tác giả luận văn

Xaykham THIPPHAVONG

ii

LỜI CẢM ƠN

Tôi xin chân thành cảm ơn chính phủ hai nước Lào và Việt Nam đã dành

cho tôi học bổng học tập, để tôi có thể bước chân vào học tập và nghiên cứu tại

Khoa Sinh học, Trường Đại học sư phạm - Đại học Thái Nguyên.

Tôi xin được bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Phạm Thị Thanh Nhàn,

người đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo và tạo mọi điều kiện, giúp đỡ tôi trong

quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn.

Tôi xin cảm ơn các thầy cô và cán bộ Khoa Sinh học, bộ phận Sau đại học

của Phòng Đào tạo, Trường Đại học Sư phạm Thái Nguyên đã trang bị cho tôi

những kiến thức, kinh nghiệm quý giá về các môn học liên quan đến chuyên

ngành của tôi và tạo điều kiện cho tôi hoàn thành khóa học.

Tôi xin cảm ơn toàn thể đồng nghiệp, gia đình, bạn bè đã động viên, giúp

em vượt qua những khó khăn trong suốt thời gian học tập, nghiên cứu và sinh

sống tại Thái Nguyên, Việt Nam.

Mặc dù đã cố gắng rất nhiều trong thời gian thực hiện đề tài luận văn

nhưng năng lực và kinh nghiệm còn hạn chế, em rất mong nhận được sự ý kiến

nhận xét của quý thầy cô để luận văn của em được hoàn thiện hơn.

Thái Nguyên, tháng 7 năm 2021

Tác giả luận văn

Xaykham THIPPHAVONG

iii

MỤC LỤC

Lời cam đoan ........................................................................................................ i

Lời cảm ơn...........................................................................................................ii

Mục lục ...............................................................................................................iii

Những chữ viết tắt .............................................................................................. iv

Danh mục các bảng.............................................................................................. v

Danh mục các hình ............................................................................................. vi

MỞ ĐẦU.............................................................................................................1

1. Đặt vấn đề.....................................................................................................1

2. Mục tiêu nghiên cứu.....................................................................................2

3. Nội dung nghiên cứu....................................................................................2

4. Ý nghĩa khoa học của đề tài.........................................................................2

CHƢƠNG 1: T NG QUAN TÀI LI U...............................................................3

1.1. Giới thiệu về cây mô hình.........................................................................3

1.2. Hợp chất rotundin và enzyme Columbamine O-methyltransferase..........4

1.2.1. Hợp chất rotundin .............................................................................4

1.2.2. Enzyme Columbamine O- methyltransferase...................................7

1.3. Kỹ thuật chuyển gen thực vật và ứng dụng cải thiện hàm lượng

dược chất trong cây thuốc lá ............................................................................9

1.3.1. Phương pháp chuyển gen ở thực vật ................................................9

1.3.2. Kỹ thuật chuyển gen thông qua vi khuẩn Agrobacterium

tumefaciens ở thực vật................................................................................10

1.3.3. Phân tích sự có mặt của gen chuyển trong cây chuyển gen ...........12

CHƢƠNG 2: VẬT LI U VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.......................19

2.1. Vật liệu nguyên cứu ................................................................................19

2.1.1. Vật liệu thực vật..............................................................................19

2.1.2. Chủng vi khuẩn...............................................................................19

2.1.3. Hóa chất và thiết bị.........................................................................19