Lai ADN – Phần 1 pptx

Lai ADN – Phần 1

Nguyên tắc được tiến hành như sau: ADN tổng số được tách ra và xử lý với

enzym cắt hạn chế (có trường hợp không cần xử lý với enzym cắt hạn chế) sau đó

điện di trên gel agarose và chuyển lên màng lai. Mẫu dò (probe) được chuẩn bị và

lai với màng ADN ở trên. Kết quả phép lai cho biết sự khác biệt giữa các mẫu

ADN khác nhau.

Phép lai được tiến hành ở đây dựa vào cấu trúc sợi đôi ADN từ hai sợi đơn

với các cầu liên kết hydrogene theo nguyên tắc bổ sung. Bắt đầu là đứt gãy các

liên kết hydrogene do hoá chất (kiềm) hay biến tính nhiệt, lúc này hai sợi đơn

ADN tách nhau được gọi là trạng thái biến tính ADN (denature). Nếu tại thời

điểm này người ta cho vào một ADN đánh dấu biến tính (mẫu dò) sau đó tạo điều

kiện hồi biến xuất hiện (renature), lúc đó sẽ cho phép các sợi đơn của mẫu dò bắt

cặp với các sợi đơn của mẫu ADN ban đầu (target ADN). Mức độ lai sẽ phụ thuộc

vào tính đặc hiệu (sự tương đồng) giữa mẫu dò và mẫu gốc cũng như điều kiện

cho phép lai thực hiện (nhiệt độ, nồng độ muối, pH, tỷ lện mẫu dò, kích thước mẫu

dò). Như vậy, việc chọn điều kiện chính xác cho phép lai có ý nghĩa rất quan trọng

cho tính đặc hiệu của kết quả phép lai. Sau khi lai, bước tiếp theo là rửa bằng đệm

thích hợp để loại mẫu dò dư và cuối cùng là phép đo bức xạ đánh dấu (tuỳ theo