Đánh giá hoạt tính sinh học LH và FSH của hormone eCG tái tổ hợp trên dòng tế bào HEK293 và mLTC-1

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƢỜNG ĐẠI HỌC QUY NHƠN

VÕ THỊ THU HIỀN

ĐÁNH GIÁ HOẠT TÍNH SINH HỌC LH VÀ FSH CỦA

HORMONE eCG TÁI TỔ HỢP TRÊN DÒNG

TẾ BÀO HEK293 và mLTC-1

Chuyên ngành: SINH HỌC THỰC NGHIỆM

Mã số: 8420114

Ngƣời hƣớng dẫn: PGS.TS. Nguyễn Thị Mộng Điệp

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là

trung thực và chưa được sử dụng để bảo vệ một học vị nào.

Tôi xin cam đoan mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã

được cảm ơn và các thông tin trích dẫn trong luận văn đã được chỉ rõ nguồn

gốc và được phép công bố.

Bình Định, tháng 08 năm 2022

Học viên

Võ Thị Thu Hiền

LỜI CẢM ƠN

Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc và kính trọng tới Ban giám

hiệu Trường Đại học Quy Nhơn, Quý Thầy Cô trong trường đã tạo điều kiện

cũng như truyền thụ những kiến thức quý báu để tôi có thể hoàn thành khóa

học.

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành nhất đến PGS.TS. Nguyễn Thị

Mộng Điệp, người cô đầy tâm huyết đã luôn tạo mọi điều kiện tốt nhất để tôi

có thể hoàn thành luận văn này. Cô luôn tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tôi trong

cả quá trình nghiên cứu khoa học, là nguồn động lực lớn giúp tôi vượt qua

được những khó khăn trong quá trình hoàn thành luận văn.

Tôi xin chân thành cảm ơn Quỹ Đổi mới sáng tạo Vingroup (VINIF) đã

tài trợ kinh phí cho chúng tôi thực hiện đề tài nghiên cứu này.

Xin cảm ơn các thầy tại Học viện Quân y Hà Nội đã hết lòng giúp đỡ,

tạo điều kiện cho tôi trong quá trình thực hiện luận văn này.

Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, bạn bè, người thân cùng

tập thể lớp Sinh học thực nghiệm K23 đã luôn động viên và giúp đỡ tôi trong

quá trình học tập và thực hiện đề tài nghiên cứu này.

Do thời gian và sự hiểu biết của bản thân có hạn nên luận văn khó tránh

khỏi sai sót. Tôi mong nhận được lời góp ý, chỉ bảo của thầy cô để có thể

hoàn thiện hơn luận văn này.

Bình Định, tháng 08 năm 2022

Học viên

Võ Thị Thu Hiền

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN

LỜI CẢM ƠN

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

DANH MỤC BẢNG VÀ BIỂU ĐỒ

DANH MỤC HÌNH ẢNH

MỞ Đ U........................................................................................................................1

1. Lý do chọn đề tài........................................................................................................1

2. Mục đ ch và nhiệm vụ nghi n cứu...........................................................................2

3. Đối tượng và phạm vi nghiên cứu............................................................................3

4. ngh a khoa học và thực ti n của đề tài.................................................................3

4.1. ngh a khoa học ....................................................................................................3

4.2. ngh a thực ti n.....................................................................................................3

5. Những đóng góp mới của đề tài ...............................................................................3

CHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU................................4

1.1. Tổng quan về hormone gonadotropin...................................................................4

1.2. Tổng quan về eCG..................................................................................................8

1.2.1. Nguồn gốc và cấu trúc của eCG.........................................................................8

1.2.2. Hoạt động sinh học của eCG............................................................................10

1.2.3. Chức năng của eCG...........................................................................................11

1.3. Những nghiên cứu về eCG tái tổ hợp .................................................................13

1.4. Tổng quan về tế bào HEK293 và mLTC-1........................................................19

1.4.1. Tổng quan về tế bào HEK293..........................................................................19

1.4.2. Tổng quan về tế bào mLTC-1 ..........................................................................21

CHƢƠNG 2. ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN

CỨU..............................................................................................................................25

2.1. Đối tượng nghiên cứu: Hoạt tính sinh học LH và FSH của hormone eCG tái

tổ hợp chuỗi đơn...........................................................................................................25

2.2. Hóa chất và thiết bị...............................................................................................25

2.3. Nội dung nghiên cứu ............................................................................................26

2.3.1. Xác định hoạt tính sinh học LH của eCG tái tổ hợp in vitro.........................26

2.3.1.1. Xác định nồng độ cAMP tạo ra trong tế bào mLTC-1 đáp ứng với

kích hoạt của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn............................................................26

2.3.1.2. Xác định nồng độ Progesterone sản sinh ra trong tế bào mLTC-1 đáp

ứng với kích hoạt của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn. ............................................26

2.3.1.3. Xác định nồng độ ATP sản sinh ra trong tế bào mLTC-1 đáp ứng với

kích hoạt của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn............................................................26

2.3.1.4. Xác định tỷ lệ sống của tế bào sau khi kích kích bằng eCG tái tổ hợp

chuỗi đơn..............................................................................................................26

2.3.2. Xác định hoạt tính sinh học FSH của eCG tái tổ hợp in vitro.......................26

2.3.2.1. Xác định nồng độ cAMP tạo ra trong tế bào HEK293 đáp ứng với

kích hoạt của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn............................................................26

2.3.2.2. Xác định nồng độ Progesterone sản sinh ra trong tế bào HEK293 đáp

ứng với kích hoạt của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn. ............................................26

2.3.2.3. Xác định nồng độ ATP sản sinh ra trong tế bào HEK293 đáp ứng với

kích hoạt của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn............................................................26

2.3.2.4. Xác định tỷ lệ sống của tế bào sau khi kích kích bằng eCG tái tổ hợp

chuỗi đơn..............................................................................................................26

2.4. Phương pháp nghi n cứu .....................................................................................26

2.4.1. Nuôi cấy tế bào ..................................................................................................26

2.4.2. Phương pháp t nh tỷ lệ sống của tế bào trong hộp nuôi cấy..........................28

2.4.3. Phương pháp xác định nồng độ cAMP ...........................................................29

2.4.4. Phương pháp xác định nồng độ của progesterone sản xuất trong tế bào .....29

2.4.5. Xác định mức năng lượng ATP trong tế bào..................................................30

2.4.6. Phương pháp t nh tỷ lệ sống tế bào trong đ a nuôi cấy..................................31

2.4.7. Phương pháp xử lý các số liệu..........................................................................32

CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN............................................................33

3.1. Xác định hoạt tính sinh học LH và FSH của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn in vitro

thông qua nồng độ cAMP tạo ra trong tế bào mLTC-1, HEK293 đáp ứng với kích

thích của eCG. ..............................................................................................................33

3.2. Xác định nồng độ Progesterone sản sinh ra trong tế bào mLTC-1 và HEK293

đáp ứng với kích hoạt của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn. ..............................................39

3.3. Xác định nồng độ ATP sản sinh ra trong tế bào mLTC-1 và HEK293 đáp ứng

với kích hoạt của eCG tái tổ hợp chuỗi đơn. .............................................................43

3.4. Xác định tỷ lệ sống của tế bào mLTC-1 và HEK293 sau khi kích kích bằng

eCG tái tổ hợp chuỗi đơn. ...........................................................................................46

KẾT LUẬN.................................................................................................................49

1. KẾT LUẬN..............................................................................................................49

2. KIẾN NGHỊ.............................................................................................................50

DANH MỤC TÀI LIỆU THAM KHẢO..............................................................51

PHỤ LỤC

QUYẾT ĐỊNH GIAO ĐỀ TÀI LUẬN VĂN THẠC SĨ (BẢN SAO)