Xây dựng kỹ thuậ t RT – PCR phát hiện viêm gan siêu vi C pdf

Xây dựng kỹ thuật RT – PCR phát hiện viêm gan siêu vi C đồng thời định

genotype HCV bằng lai trên vạch dò đặc hiệu của thanh inoLIPA

Hoàng Hiếu Ngọc ( 1 ) , Phạm Hùng Vân( 2 )

Tóm tắt

Đặt vấn đề: Viêm gan siêu vi C là một trong những nguyên nhân gây xơ gan và ung thư gan (1-8 ). Qui trình kỹ

thuật RT – PCR nhằm phát hiện, xác định genotype HCV do chúng tôi xây dựng với mục đích giúp định hướng

và theo dõi điều trị viêm gan siêu vi C.

Mục tiêu: Xây dựng kỹ thuật RT – PCR để phát hiện HCV đồng thời xác định kiểu gen của virus viêm gan C

bằng kỹ thuật lai trên vạch dò đặc hiệu của thanh InoLipa của Bayers.

Phương pháp nghiên cứu: Chúng tôi xây dựng kỹ thuật RT – PCR dùng mồi đặc hiệu cho vùng 5’ không mã

hóa của bộ gen HCV có gắn biotin để phát hiện RNA HCV. Sau đó, những sản phẩm PCR này được định

genotype bằng phương pháp lai trên vạch dò đặc hiệu INOLiPA do gắn sẵn chất đánh dấu biotin trước đó. 45

mẫu huyết thanh HCV (+) và 15 mẫu HCV (-) đã xác định bằng kỹ thuật RT – PCR thông thường, lấy trong

thời gian từ 3/2005 đến 7/2005, được tiến hành thử nghiệm phát hiện RNA HCV bằng qui trình kỹ thuật mới

cùng với kỹ thuật RT – PCR thông thường và kỹ thuật Nested PCR của Bayer. Những sản phẩm PCR có HCV

(+) sẽ tiếp tục định genotype bằng phương pháp lai.

Kết quả: Với mỗi qui trình PCR, chúng tôi đều thu được kết quả 45 mẫu HCV (+) và 15 mẫu HCV (-) như ban

đầu. Các mẫu HCV (+) từ kỹ thuật PCR thông thường không thể tiếp tục định genotype HCV vì không có chất

đánh dấu biotin. Các mẫu HCV (+) từ kỹ thuật Nested PCR và kỹ thuật do chúng tôi xây dựng đều xác định

được genotype và cho kết quả genotype giống như nhau.

Kết luận: Qui trình kỹ thuật RT – PCR phát hiện RNA HCV bằng mồi có gắn biotin và định genotype HCV

bằng phương pháp lai trên vạch do chúng tôi xây dựng và thử nghiệm đã thành công, cho kết quả chính xác như

đối với kỹ thuật RT – PCR thông thường và Nested PCR.

Abstracts

Setting up the RT – PCR technique to detect hepatitis C virus and determine genotype HCV by

hybrilizing PCR products on specific inoLIPA strip.

Background: Hepatitis C virus is one of reasons that causes cirrhosis and hepatic cell carcinoma. The new RT

– PCR technique is set up to detect HCV and determine its genotypes with the aim of orientating and following

treatment of HCV.

Objectives: Setting up RT – PCR technique to detect hepatitis C virus and determine genotype HCV by

hybrilizing PCR products on specific Inolipa stripe.

Method: The primers bound to biotin were designed specifically to 5’ noncoding region of HCV genome and

detected RNA HCV by using RT – PCR. These PCR products then can be used to find HCV genotypes by

hybridizing to immobilized probes on nitrocellulose stripes. 45 serum samples with HCV (+) and 15 serum

samples with HCV (-), which had been known by ordinary RT – PCR, will be tested by new RT – PCR

technique, ordinary RT - PCR and Nested PCR. Then PCR products with HCV (+) will be determined HCV

genotypes.

Results: From each process, we gather 45 positive samples with HCV and 15 negative samples as before.

Positive HCV PCR products from ordinary RT – PCR can not be followed to find out HCV genotypes. Positive

HCV PCR products from the last two processes can be used to determine HCV genotypes and results from

them are the same.

Conclusion: The new RT – PCR technique set up to detect HCV and determine its genotypes is success. The

results from it are similar to from ordinary RT – PCR and Nested PCR.

Đặt vấn đề

Hieän nay, vieâm gan sieâu vi C laø moät beänh lyù

ñöôïc nhieàu nhaø laâm saøng, dòch teã hoïc cuõng

nhö nghieân cöùu y hoïc ñaëc bieät quan taâm.

Nhöõng nghieân cöùu treân theá giôùi cho thaáy coù söï

töông quan roõ reät giöõa beänh gan maõn tính, xô

gan vaø ung thö teá baøo gan vôùi nhieãm HCV (1-8)

– thaäm chí coù lieân quan ñeán töøng type HCV

rieâng bieät (9,10). Ngoaøi ra, ñeå coù ñöôïc chæ ñònh

ñieàu trò ñaëc hieäu cuõng nhö theo doõi ñöôïc hieäu

quaû ñieàu trò thì vieäc xaùc ñònh kieåu gen HCV

trong maùu cuõng raát quan troïng. Vieäc öùng duïng

kyõ thuaät PCR trong phaùt hieän nhöõng taùc nhaân

vi sinh vaät ñaõ vaø ñang ñöôïc söû duïng ôû Vieät

Nam. Beân caïnh nhieàu giaù trò lôïi ích hôn so vôùi

caùc xeùt nghieäm huyeát thanh chaån ñoaùn, vaán

ñeà giaù caû cuûa kyõ thuaät naøy laïi laø moät yeáu toá

caàn ñöôïc quan taâm caân nhaéc. Vì theá, chuùng toâi

tieán haønh xaây döïng moät qui trình kyõ thuaät RT

– PCR nhaèm phaùt hieän vaø xaùc ñònh genotype

1

*Tác giả chính, 1Bộ môn Hóa sinh, Khoa Y, Đại Học Y Dược TP. HCM. 2Bộ Môn Vi Sinh, Khoa Y, Đại Học Y

Dược TP. HCM