Tối ưu hóa phương pháp tách chiết ADN tổng số từ răng, xương người phục vụ công tác giám định ADN tại Viện Khoa học hình sự - Bộ Công an

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC

VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM

VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT

KHOA HỌC HÌNH SỰ - BỘ CÔNG AN

LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC

HÀ NỘI - 2013

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC

VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM

VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT

LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC

Đề tài :

KHOA HỌC HÌNH SỰ - BỘ CÔNG AN

Học viên:

Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm

Mã số: 60 42 01 14

Ngƣời hƣớng dẫn: PGS. TS. Nguyễn Văn Hà

HÀ NỘI - 2013

HÀ NỘI - 2013

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

LỜI CẢM ƠN

PGS. –

– – tôi

nghiên cứu và này.

Tôi xin ch Viện Khoa học hình sự, Lãnh đạo

Trung Tâm và toàn thể

– –

.

.

.

11 năm 2013

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

M

................................................................................................................1

CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU............................................................6

1. Một số vấn đề về giám định gen ti thể...............................................................6

.........................................6

1.2. Khái niệm về giám định gen ti thể..................................................................7

1.3. Cơ sở khoa học và thực tiễn............................................................................7

1.3.1. Ti thể và hệ gen ti thể ...............................................................................7

1.3.2. Cơ sở khoa học của giám định gen ti thể...............................................10

1.4. Dị chất (heteroplasmy) trong ti thể...............................................................15

1.5. Vùng chỉ thị ADN ti thể (vùng có tính đa hình cao) và các phương pháp

giám định ADN ti thể ...........................................................................................15

2. Tình hình nghiên cứu trong và ngoài nước về lĩnh vực liên quan đến đề tài.17

2.1. Tình hình nghiên cứu ngoài nước.................................................................17

2.2. Tình hình nghiên cứu trong nước .................................................................18

NG PHÁP NGHIÊN CỨU................22

..............................................................................................................22

1.1. Thiết bị...........................................................................................................22

1.1.1 Th ....................................................................................22

...................................................................................................23

1.2. Hóa chất.........................................................................................................23

2. Phương pháp nghiên cứu..................................................................................23

2.1. Phương pháp làm sạch mẫu ..........................................................................24

2.2. Phương pháp nghiền mẫu..............................................................................24

2.3. Phương pháp tách chiết ADN ti thể..............................................................24

2.4. Phương pháp tinh sạch ADN ti thể...............................................................25

2.5. Phương pháp định lượng ADN ti thể............................................................25

2.6. Phương pháp PCR.........................................................................................25

2.7. Phương pháp tinh sạch sản phẩm PCR, gắn BigDye...................................26

2.8. Phương pháp chạy điện di, giải trình tự ADN ti thể ....................................26

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

2.9. Tối ưu hóa phương pháp tách chiết ADN ti thể từ mẫu răng và xương người..26

2.9.1. Tối ưu hóa nồng độ chelex 100TM........................................................26

......................................27

CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ BÀN LUẬN...........................28

1. Kết quả nghiên cứu..........................................................................................28

1.1. Kết quả tách chiết ADN ti thể.......................................................................28

1 đến 5 năm):............28

từ 5 đến 10 năm):..........29

1.2. Kết quả tối ưu hóa phương pháp tách chiết ADN ti thể từ mẫu răng và

xương người..........................................................................................................30

1.2.1. Kết quả tối ưu hóa nồng độ Chelex 100TM ..........................................30

..........................31

.......................32

1.3.1. Làm sạch mẫu răng và xương ................................................................32

1.3.2. Nghiền mẫu răng và xương ....................................................................32

1.3.3. Tách chiết ADN ti thể từ xương và răng bằng chelex 100™................33

1.3.4. Tách chiết ADN ti thể từ xương và răng bằng tách hữu cơ ..................33

1.3.5. Tách chiết ADN ti thể từ xương và răng bằng Kit Prepfiler.................34

1.3.6. Tinh sạch ADN sử dụng bộ kit DNA IQTM System............................36

1.3.7. Định lượng ADN sử dụng bộ kit Human DNA Quantification............36

1.3.8. Chuẩn bị và chạy phản ứng Nested PCR nhân bội sản phẩm ADN.....37

1.3.9. Phản ứng Sequencing (gắn Big Dye).....................................................38

1.3.10. Chuẩn bị mẫu cho điện di giải trình tự.................................................38

1.3.11. Giải trình tự trên máy ABI 310 ............................................................39

..........................................................................................................41

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ...........................................................................43

1. Kết luận:............................................................................................................43

2. Kiến nghị: .........................................................................................................43

TÀI LIỆU THAM KHẢO.................................................................................45

PHỤ LỤC....................................................................................................... 47

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

- ADN : Axit deoxyribonucleic

- ARN : Axit ribonucleic

- CSĐT : Cảnh sát điều tra

- DTT : Dithiothreitol (tên hoá chất)

- KHHS : Khoa học hình sự

- PCR : Polymerase chain reaction (phản ứng nhân bội gen)

- PrK : Proteinaza K

- STR : Short tandem repeat (đoạn lặp lại ngắn)

- TS : Tiến sĩ

- VNTR : Variable number of tenderm repeat (đoạn lặp có độ dài

trung bình)

- X : xương

- R : răng

Số hóa bởi Trung tâm Học liệu http://www.lrc-tnu.edu.vn/

Số hiệu bảng Tên Bảng Trang

1.1 12

3.1 Kết quả định lượng 3 phương pháp tách chiết đối với

mẫu răng, xương (thời gian chôn cất từ 1-5 năm)

28

3.2 Kết quả định lượng 3 phương pháp tách chiết đối với

mẫu răng, xương (thời gian chôn cất từ 5-10 năm)

30

3.3 Kết quả định lượng tối ưu hoá nồng độ chelex đối với

mẫu răng, xương (thời gian chôn cất từ 1-5 năm)

31

3.4 Kết quả định lượng tối ưu hoá thể tích d/d hạt từ đối

với mẫu răng, xương(thời gian chôn cất từ 5-10 năm)

32

HÌNH

Số hiệu hình Tên hình Trang

1.1 Ti thể trong tế bào người 8

1.2 Cấu trúc hệ gen ti thể người 11

1.3 Phả hệ xác định di truyền theo dòng mẹ ADN ti thể

inheritance (maternal)

14