Tài liệu BƯỚC ĐẦU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SOUTHERN BLOT PHÂN TÍCH ĐA DẠNG DI TRUYÊN NẤM Magnaporthe grisea

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC



ĐẶNG TRẦN ANH THƢ

BƢỚC ĐẦU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT

SOUTHERN BLOT PHÂN TÍCH ĐA DẠNG DI

TRUYÊN NẤM Magnaporthe grisea

GÂY BỆNH ĐẠO ÔN TRÊN CÂY LÚA

LUẬN VĂN KỸ SƢ

CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Thành phố Hồ Chí Minh

Tháng 9/2006

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC



BƢỚC ĐẦU ỨNG DỤNG KỸ THUẬT

SOUTHERN BLOT PHÂN TÍCH ĐA DẠNG DI

TRUYÊN NẤM Magnaporthe grisea

GÂY BỆNH ĐẠO ÔN TRÊN CÂY LÚA

LUẬN VĂN KỸ SƢ

CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực hiện

LÊ ĐÌNH ĐÔN ĐẶNG TRẦN ANH THƢ

KHÓA: 2002 - 2006

Thành phố Hồ Chí Minh

Tháng 9/2006

MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING

NONG LAM UNIVERSITY, HCMC

FACULTY OF BIOTECHNOLOGY



POPULATION STRUCTURE OF

Magnaporthe grisea EXAMINED INITIALLY

BY SOUTHERN BLOT

GRADUATION THESIS

MAJOR: BIOTECHNOLOGY

Professor Student

LE DINH DON DANG TRAN ANH THU

TERM: 2002 - 2006

HCMC, 09/2006

i

LỜI CẢM TẠ



TÔI CHÂN THÀNH CẢM ƠN

Ban Giám Hiệu trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh

Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh

Bộ Môn Bảo vệ Thực vật, Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh

Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh, Đại Học Nông Lâm Thành Phố

Hồ Chí Minh

Đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian thực tập để hoàn

thành khóa luận tốt nghiệp này.

TÔI TRÂN TRỌNG BIẾT ƠN

Thầy Lê Đình Đôn đã tận tình hướng dẫn, tạo mọi điều kiện giúp đỡ chúng tôi

hoàn thành khóa luận này.

Thầy Bùi Cách Tuyến, thầy Bùi Minh Trí đã tạo điều kiện cho chúng tôi thực

tập tại Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh.

Thầy Nguyễn Đức Sáng đã giúp đỡ tôi về hóa chất và vật liệu nghiên cứu

trong thời gian làm đề tài.

Anh Nguyễn Văn Lẫm đã nhiệt tình chỉ dẫn tôi trong suốt quá trình thực

hiện đề tài.

Các anh chị ở Trung Tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh, các anh chị ở bộ

môn Bảo Vệ Thực Vật, trường Đại Học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh đã nhiệt tình

giúp đỡ chúng tôi hoàn thành khóa luận.

Các thành viên lớp Công Nghệ Sinh Học 28 đã động viên, giúp đỡ chúng tôi

trong thời gian thực tập.

CON THÀNH KÍNH BIẾT ƠN

Cha Mẹ, các em và người thân trong gia đình đã ủng hộ và hỗ trợ con về mặt vật

chất cũng như tinh thần để con có thể hoàn thành tốt khóa học này.

TP Hồ Chí Minh tháng 8/2006

Đặng Trần Anh Thư

ii

TÓM TẮT KHÓA LUẬN



ĐẶNG TRẦN ANH THƯ, Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh. Tháng

08/2006. “Bƣớc đầu ứng dụng kỹ thuật Southern Blot phân tích tính đa dạng

di truyền của nấm Magnaporthegrissea gây bệnh đạo ôn trên cây lúa”.

Giáo viên hướng dẫn: LÊ ĐÌNH ĐÔN

 Cơ sở nghiên cứu: Sử dụng marker phân tử RFLP trên cở sở phương pháp

Southern blot và phân tích sự khác biệt về sự thay đổi cấu trúc gen dẫn đến

phân tích tính đa dạng di truyền của một số dòng nấm Magnaporthe grisea.

 Mục đích nghiên cứu: Nghiên cứu tính đa dạng di truyền của một số dòng nấm

Magnaporthe grisea, làm cơ sở để đánh giá và có phương pháp phòng trị cho

phù hợp.

 Phƣơng pháp nghiên cứu:

- Thực hiện ly trích và phân cắt genomic DNA bằng enzyme cắt giới hạn

- Tiến hành phân tách các đoạn DNA cắt giới hạn trên gel agarose, chuyển

và cố định DNA lên màng

- Thực hiện phản ứng lai với phân tử probe là DNA plasmid được đánh dấu

và phát hiện bằng huỳnh quang

- Sử dụng phần mềm để phân tích tính đa dạng di truyền.

 Kết quả:

- DNA ly trích tốt và thực hiện thành công phản ứng cắt giới hạn

- Biến nạp và ly trích thành công các loại plasmid được cung cấp để đánh

dấu sư dụng cho phản ứng lai phát hiện MAGGY trong genome của M. grisea

- Thực hiện phản ứng lai với probe pMGY-SB thành công đối mẫu đối

chứng là plasmid pMGY-SB.

 Kết luận :

Do quy trình Southern blot chưa hoàn thiện trong điều kiện phòng thí nghiệm ở

TT PTTNHS của trường Đại học Nông Lâm và hạn chế về mặt thời gian nên

kết quả của phản ứng lai đã không đi đến thành công. Do đó, không có cơ sở để

phân tích sự đa dạng di truyền trên nấm M. grisea.