phát triển quy trình mpcr phát hiện mbv ( monodon baculovirus), wssv (white spot syndrome virus) và

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA THỦY SẢN

TRẦN VIẾT TOÀN

PHÁT TRIỂN QUY TRÌNH mPCR PHÁT HIỆN MBV

( Monodon baculovirus), WSSV (White spot syndrome virus)

VÀ GEN BETA-ACTIN TRÊN TÔM SÚ (Penaeus monodon)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

NGHÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN

2009

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA THỦY SẢN

TRẦN VIẾT TOÀN

PHÁT TRIỂN QUY TRÌNH mPCR PHÁT HIỆN MBV

( Monodon baculovirus), WSSV (White spot syndrome virus)

VÀ GEN BETA-ACTIN TRÊN TÔM SÚ (Penaeus monodon)

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC

NGHÀNH BỆNH HỌC THỦY SẢN

CÁN BỘ HƯỚNG DẪN

BÙI THỊ BÍCH HẰNG

2009

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com

i

LỜI CẢM TẠ

Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đối với cô Bùi Thị Bích Hằng đã tận tâm

hướng dẫn, chỉ bảo, cung cấp tài liệu cũng như những kinh nghiệm giúp tôi

hoàn thành được đề tài.

Tôi xin chân thành cám ơn toàn thể quý thầy cô, anh chị Bộ môn Sinh Học và

Bệnh Thủy Sản – Khoa Thủy Sản, Trường Đại Học Cần Thơ đã giúp đỡ và tạo

mọi điều kiện thuận lợi cho tôi hoàn thành tốt đề tài luận văn tốt nghiệp.

Chân thành cám ơn các bạn lớp Bệnh học thủy sản K31 đã động viên và ủng

hộ tôi thực hiện được đề tài này.

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com

ii

TÓM TẮT

Đề tài được thực hiện nhằm phát triển và ứng dụng quy trình mPCR phát hiện

đồng thời MBV và WSSV trên tôm sú (Penaeus monodon). Sau khi thực hiện

quy trình mPCR của (Karlo et al., 2006) với mẫu dương tính với MBV cho

kết quả ở vị trí 361bp. Sau đó tiếp tục phát triển quy trình mPCR phát hiện

đồng thời MBV và gen β-actin cho kết quả hiện hai vạch ở vị trí 361bp (MBV)

và 216 (β-actin). Trên cơ sở kết quả đạt được, thực hiện quy trình mPCR phát

hiện MBV và WSSV kết quả cho thấy hiện vạch 1441bp (WSSV) ở bước 1,

hiện đồng thời hai vạch 941bp (WSSV) và 361bp (MBV) ở bước 2. Thực hiện

tiếp quy trình phát hiện MBV, WSSV và gen β-actin nhưng kết quả ở hai bước

chỉ hiện vạch của WSSV (1441bp, 941bp).

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com

iii

MỤC LỤC

LỜI CẢM TẠ............................................................................................................i

TÓM TẮT................................................................................................................ ii

MỤC LỤC................................................................................................................iii

DANH SÁCH BẢNG............................................................................................... v

DANH SÁCH HÌNH............................................................................................... vii

CHƯƠNG I: GIỚI THIỆU ....................................................................................... 1

CHƯƠNG II: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU................................................................... 2

2.1 Tình hình chung về tôm ........................................................................... 3

2.1.1. Tình hình nuôi tôm trên thới giới............................................... 3

2.1.2. Tình hình ở Việt Nam................................................................ 4

2.2. Tổng quang về tình hình dịch bệnh trên tôm............................................ 5

2.2.1. Trên thới giới............................................................................. 5

2.2.2. Ở Việt Nam............................................................................... 7

2.3. Bệnh Monodon Baculovirus (MBV) ...................................................... 8

2.3.1 Tác nhân gây bệnh ..................................................................... 8

2.3.2 Vật chủ cảm nhiễm..................................................................... 8

2.3.3 Dấu hiệu bệnh lý ........................................................................ 8

2.3.4 Kiểu lan truyền........................................................................... 9

2.3.5 Phương pháp chuẩn đoán............................................................ 9

2.3.6 Các biện pháp kiểm soát bệnh ................................................... 10

2.4. Bệnh đốm trắng WSSV.......................................................................... 11

2.4.1 Tác nhân gây bệnh .................................................................... 11

2.4.2 Vật chủ cảm nhiễm.................................................................... 11

2.4.3 Dấu hiệu bệnh lý ....................................................................... 12

2.4.4 Kiểu lan truyền.......................................................................... 12

2.4.5 Phương pháp chuẩn đoán........................................................... 13

2.4.6 Các biện pháp kiểm soát bệnh ................................................... 14

2.5.Sơ lược về gen β-actin ............................................................................ 14

2.6. Kỹ thuật Polymerase Chain Reaction (PCR) .......................................... 14

2.6.1 Một số nhân tố chính ảnh hưởng đến phản ứng PCR ................. 16

2.6.2 Ứng dụng của phương pháp PCR Thủy sản ............................... 17

CHƯƠNG III: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .................................................... 19

3.1. Thời gian và địa điễm nghiên cứu .......................................................... 19

3.2. Dụng cụ và hóa chất.............................................................................. 19

3.3. Phương pháp nghiên cứu....................................................................... 20

3.3.1. Vật liệu nghiên cứu .................................................................. 20

3.3.2. Ly trích DNA ........................................................................... 20

PDF created with FinePrint pdfFactory Pro trial version http://www.fineprint.com