Nuôi cấy tế bào

Kỹ thuật nuôi cấy tế bào 2011

Ứng dụng kỹ thuật nuôi cấy trong phòng

thí nghiệm.

Tác Giả : Lê Hoàng Duy

Danh mục :

Chương 1 : Sơ chế các chất cần thiết cho nuôi

cấy.

Chương 2 : Hướng dẫn nuôi cấy Vi khuẩn.

Chương 3 : Hướng dẫn nuôi cấy tế bào thực vật.

Chương 4 : Hướng dẫn nuôi cấy tế bào động vật

và động vật hữu nhũ.

Lời Ngỏ :

Tài liệu tham khảo từ 1 cuốn sách chuyên nghành sinh học xuất bản năm 1972, tài liệu để tham

khảo thêm cho sinh viên chuyên nghành công nghệ sinh học. Tài liệu này không phải tài liệu xét

nghiệm chỉ tập trung vào kiến thức nuôi cấy tế vào và vi sinh vật, kiến thức cơ bản cho công

nghệ tế bào gốc sau này, nhìn chung công nghệ hiện nay sử dụng máy móc để giảm gánh

nặng cho các nhà nghiện cứu nhưng cách thức nuôi cấy vẫn không khác gì những năm đầu

của công nghệ sinh học.

Chương 1 : Sơ chế các chất cần thiết cho nuôi cấy.

Dung dịch Hanks

Đậm gấp 10 lần.

Cách pha :

Khotien.vn | Tài liệu được viết bởi Lê Hoàng Duy 1

Kỹ thuật nuôi cấy tế bào 2011

Pha 2 dung dịch riêng A và B riêng rẽ sau đó kết hợp lại :

Dung dịch A :

NaCl : 80g.

KCl : 40g.

7H2O + MgSO4 : 1g.

MaCl2. .6H2O : 1g.

CaCl2 : 1,4g

Nước cất 2 lần 500ml.

Dung dịch B :

Na2HPO4.2H2O : 0,75g

Na2HPO4.12H2O : 1,5g.

KH2PO4 : 0,6g.

Glucozơ : 10g

Nước cất 2 lần 480 ml.

** Pha 2 dung dịch muối như trên sau đó đổ dung dịch A vào dung dịch B một cách từ từ vừa

đổ vừa khuấy. Cuối cùng cứ mỗi lít dung dịch cho thêm 20 ml dung dịch 1% đỏ phenol. Lọc qua

lọc giấy, để làm tiệt trùng thì có 2 cách :

+ Cách thứ 1 là cách tốt nhất là lọc qua Seitz (lọc ngăn vi khuẩn).

+ Cách 2 sấy ước ở 100 độ C trong 20 phút, sấy 3 lần trong 3 ngày liên tiếp. Nhưng trong

trường hợp này CaCl2 phải pha riêng vào cho thêm sau khi sấy, trước khi dùng.

 Tiệt trùng xong thì đóng vào lọ 500-1000 ml đậy kín bằng nút cao su. Thử vô trùng

bằng cách cấy 0,5 ml dung dịch vào môi trường canh thang thịt – pepton và thách

Sabouraud.

 Bảo quản dung dịch mẹ trong tủ lạnh có thể bảo quản được đến 6 tháng. Trước khi

dùng đem pha loãng 10 lần với nước cất 2 lần vô trùng. Dung dịch làm việc đem sấy

100 độ C, 10 phút với áp suất 0,7 at , điều chỉnh PH bằngng dung dịch bica 1,4% có

PH = 7,2 – 7,4.

 Cứ 100 ml dung dịch cho 2,5 – 3 ml.

Chú ý :

+ Dung dịch làm việc trong phòng không quá 1 tháng.

Khotien.vn | Tài liệu được viết bởi Lê Hoàng Duy 2