Nguyên tắc cơ bản của PCR pps

Nguyên tắc cơ bản của PCR

+ Khái quát chung:

PCR là phương pháp dùng enzym khuyếch đại chọn lọc một đoạn ADN

theo luật số mũ. Phản ứng nhân gene được thực hiện với enzym ADN chịu nhiệt,

hai mồi tổng hợp và 4 loại deoxyribonucleic (dATP, dGTP, dCTP và dTTP). Mỗi

một chu kỳ phản ứng nhân gene gồm 3 bước (xem hình vẽ minh hoạ): Bước 1 là

biến tính ADN, có tác dụng tách hai sợi đơn từ sợi khuôn xoắn kép. Bước 2 là bắt

cặp hai mồi vào hai sợi đơn của khuôn. Bước 3 là kéo dài chuỗi theo mồi, chiều

5’-3’ với quá trình trùng hợp gắn các dNTP dọc theo sợi khuôn để tạo thành phiên

bản mới theo nguyên tắc bổ sung. Tính đặc hiệu của phản ứng được quy định bởi

mồi và sự sao chép trực tiếp theo trình tự sợi khuôn giữa hai mồi. Như vậy, kết

quả tạo ra hàng triệu phiên bản sợi khuôn trong vài giờ.

Mồi cho phản ứng là các đoạn ADN có kích thước 20-30 nucleotid được

thiết kế theo trình tự của đoạn gene cần khuyếch đại dựa theo dữ liệu có sẵn. Mỗi

cặp mồi phải hoàn thành chức năng của mình trong toàn bộ phản ứng, tức là chúng

phải bám đặc hiệu vào đúng vị trí riêng cho từng mồi. Sở dĩ như vậy là do nếu

chúng không bám vào vị trí đặc hiệu thì không thể khuyếch đại được đoạn gene

đích. Với các gene có độ bảo thủ cao như rADN thì khi cặp mồi được thiết kế thì