Nghiên cứu và xây dựng quy trình ức chế hoạt tính của Enzyme α-Glucosidase từ lá cóc đỏ (Lumnitzera Litterea)

----------

BÁO CÁO

Tên đề tài:

Ê Ứ

Ứ

-GLUCOSIDASE Ừ

(LUMNITZERA LITTOREA)

S

UY : T

GVHD:

SVTH:

MSSV: 1153010176

-2015

Tp. ồ hí Minh, ngày 05 tháng 05 năm 2015

Trong su t th i gi n h t p t i kho ng gh Sinh – Tr ng i h

Th nh ph ồ hí inh m xin h n th nh m n qu Th y y o

v truy n t ho m nh ng ki n th qu áu l m n n t ng v ng h ho m su t

nh ng tháng năm h t p tr n gi ng ng ng nh trong ng vi s u n y.

m xin g i l i i t n s u s n Th s guy n Th Thủy v Th s

guy n Th h ng h nh ng i d nh r t nhi u th i gi n v t m huy t h ớng

n nghi n u t n t nh gi p h o v t o m i i u ki n thu n l i ho m

ho n th nh t t kh lu n t t nghi p.

n nh m h n th nh g i l i m n n Th s guy n inh o ng

ng i h o em trong nh ng ớ u ủ nghi n u v t o ho m ni m m

m v kho h . T i xin m n n t t á n ng l m vi trong ph ng thí

nghi m Sinh ủng h t i v m t tinh th n m ho n th nh t t kh lu n t t

nghi p.

V tr n h t on xin g i l i m n t t n áy l ng m nh n v nh

H i v hăm s y l i m t tinh th n v ng h ồng th i l ng l

on th hi n t t huy n kh lu n ủ m nh.

Em n n n m n

Tp. ồ hí inh tháng 05 năm 2015

g i th hi n

guy n Th im

...................................................................................................i

Ẽ ............................................................................................ii

Ầ Ổ ............................................................................................3

Ổ Ề LUMNITZERA.........................................................3

1.1.1 Phân lo i.............................................................................................................3

1.1.2 i m h nh thái .............................................................................................5

1.1.3 h n ...............................................................................................................5

1.1.4 iá tr kinh t .....................................................................................................6

1.1.5 T nh h nh nghi n u trong n ớ v ngo i n ớ ...............................................6

Ổ Ề ...................................8

1.2.1 guy n t tá h hi t........................................................................................8

1.2.2 ỹ thu t hi t lỏng - lỏng..................................................................................8

1.2.3 ỹ thu t hi t r n - lỏng ....................................................................................9

1.2.4 ỹ thu t hi t ph r n......................................................................................11

1.2.5 á y u t nh h ng n quá tr nh tá h hi t nguy n li u ...........................12

1.3 .........................................................................15

1.3.1 hái ni m.........................................................................................................15

1.3.2 h n lo i ..........................................................................................................15

1.3.3 h ng pháp i u tr ........................................................................................16

1.4 Ổ Ề α-GLUCOSIDASE.......................................17

1.4.1 Enzyme α-glucosidase .....................................................................................17

1.4.2 h t h nzym .........................................................................................18

1.5.3 T nh h nh nghi n u v kh năng h nzym α-glucosidase ..................21

Ầ Ê Ứ .............................23

2.1 V t li u.............................................................................................................23

2.1.1 i t ng nghi n u ......................................................................................23

2.1.2 i m nghi n u........................................................................................23

2.1.3 h t v thi t .........................................................................................24

2.2 Quy tr nh i u h o tổng.............................................................................25

2.3 Quy tr nh i u h o ph n o n ...................................................................26

2.4 ghi n u s nh h ng th i gi n n v n t ph n ng ủ

enzyme -glucosidase .....................................................................................29

2.5 ghi n u s nh h ng ủ nồng h t n v n t ph n ng ủ

enzyme -glucosidase ......................................................................................31

2.6 ghi n u kh năng h ho t tính ủ nzym -glu osi s t

o hi t lá ỏ...........................................................................................33

2.7 So sánh kh năng h nzym -glu osi s t o hi t lá y ỏ

v y Tr ng..............................................................................................36

2.8 Xá nh ki u h ho t tính nzym -glu osi s ủ o hi t..............38

Ầ .............................................................40

3.1 t qu i u h o tổng t lá y ỏ....................................................40

3.2 t qu i u h o ph n o n t o tổng....................................................40

3.3 t qu nghi n u s nh h ng ủ th i gi n n v n t ph n ng

enzyme -glucosidase ......................................................................................40

3.4 t qu nghi n u s nh h ng ủ nồng h t n v n t ph n ng

enzyme -glucosidase ......................................................................................43

3.5 t qu nghi n u kh năng th ho t tính h nzym -glucosidase

ủ o hi t t lá y ỏ. ........................................................................44

3.6 So sánh kh năng h nzym -glu osi s ủ á o hi t

y ỏ với y Tr ng. .......................................................................49

3.7 Xá nh ki u h ho t tính nzym -glu osi s o hi t n-hexane.....52

3.8 Xá nh ki u h ho t tính nzym -glu osi s ủ

o hi t thyl t t ......................................................................................55

Ầ Ề ..................................................................59

4.1 t lu n ............................................................................................................59

4.2 i n ngh ..........................................................................................................64

......................................................................................65

................................................................................................................. iii

i

B ng 1.1: Ưu v nh i m củ ph ng pháp hi t Soxhlet. ................................10

B ng 2.1: B trí thí nghi m nghiên c u s nh h ng của

p-nitrophenyl-α-D-Glucosidase ...............................................................32

B ng 2.2: B trí thí nghi m nghiên c u kh năng h nzym α-glucosidase

ủ o hi t ............................................................................................33

B ng 2.3: B trí thí nghi m so sánh kh năng h nzym α-glucosidase

t o hi t lá y ỏ v y Tr ng .........................................37

ng 2.4: trí thí nghi m xá nh ki u h ủ á o hi t l n

enzyme α-glucosidase..............................................................................39

B ng 3.1: S nh h ng của th i gi n n v n t c ph n ng. .................................41

B ng 3.2: t qu nghi n u s nh h ng của p-nitrophenyl-α-D-glucosidase...43

B ng 3.3: t qu kh năng c ch enzyme -glucosidase củ o hi t................45

B ng 3.4: iá tr IC50 th hi n kh năng c ch enzyme -glucosidase của

các cao chi t t lá y ỏ.................................................................47

B ng 3.5: iá tr IC50 các cao chi t củ y ỏ và cây Cóc Tr ng...................50

ng 3.6: t qu m t qu ng th o s th y ổi nồng h t

4-Nitrophenyl α- - lu opyr nos v nồng o hi t n-hexane......53

ng 3.7: ng x l s li u m u kh ng h v m u o hi t n-hexane...........54

ng 3.8: t qu m t qu ng th o s th y ổi nồng h t

4-Nitrophenyl α- - lu opyr nos v nồng o hi t ethyl acetate.56

ng 3.9: ng x l s li u m u kh ng h v m u o hi t thyl t t .....57

ii

DANH M C HÌNH VẼ

nh 1.1 : Lumnitzera littorea (Jack) Voigt ..............................................................3

nh 1.2: Lumnitzera racemosa Willd......................................................................3

nh 1.3: o ủ L. littorea ....................................................................................4

nh 1.4: o ủ L. racemosa.................................................................................4

nh 1.5: o ủ h i lo i.........................................................................................4

nh 1.6: t ủ h i lo i .........................................................................................4

nh 1.7: ồ th h nh tr nh .........................................................................19

nh 1.8: ồ th h phi nh tr nh ...................................................................19

nh 1.9: ồ th h kh ng nh tr nh ..............................................................20

nh 1.10: ồ th h h n h p.............................................................................21

nh 2.1: á y ỏ (Lumnitzera littorea) tr ớ v s u khi ph i...................23

nh 2.2: Quy tr nh i u h o tổng lá y ỏ .............................................25

nh 2.3: Quy tr nh i u h o ph n o n lá y ỏ....................................27

nh 2.4: S ồ nghiên c u s nh h ng th i gi n n v n t c ph n ng

của enzyme -glucosidase.......................................................................30

nh 2.5: S ồ nghi n u kh năng h nzym α-glu osi s t o hi t. .34

nh 2.6: S huy n h h t n n khi nzym α-glu osi s h . ................35

nh 3.1: ồ th th hi n s nh h ng của th i gi n n v n t c ph n ng

của enzyme -glucosidase.......................................................................42

nh 3.2: ồ th th hi n kh năng c ch enzyme -glucosidase của cao chi t

t lá y ỏ ......................................................................................46

iii

nh 3.3: ồ th th hi n giá tr IC50 của cao chi t t lá y ỏ và

cây Cóc Tr ng so với acarbose c ch enzyme -glucosidase ...............51

nh 3.4: ồ th i u i n 1 V th o 1 S với á nồng khá nh u ủ

o hi t n-hexane. ..................................................................................55

nh 3.5: ồ th i u i n 1 V th o 1 S với á nồng khá nh u ủ

o hi t thyl t t ..............................................................................58