Nghiên Cứu Trích Ly Flavonoid Và Xác Định Một Số Đặc Tính Sinh Hóa Của Dịch Chiết Lá Đu Đủ

i

LỜI CẢM ƠN

Để hoàn thành khóa học 2015-2019 và đánh giá khả năng kết hợp lý

thuyết với thực hành, giúp sinh viên củng cố kiến thức đã đƣợc trang bị và vận

dụng vào thực tế một cách có hiệu quả. Đƣợc sự nhất trí của Trƣờng Đại học

Lâm Nghiệp Việt Nam và Viện Công nghệ sinh học – Trƣờng Đại học Lâm

Nghiệp, tôi đã tiến hành khóa luận tốt nghiệp “Nghiên cứu trích ly Flavonoid

và xác định một số đặc tính sinh hóa của dịch chiết lá Đu đủ”.

Trong quá trình thực hiện và hoàn thành khóa luận, tôi đã nhận đƣợc sự

quan tâm, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi của Ban giám hiệu Trƣờng đại học

Lâm Nghiệp, Viện Công nghệ Sinh học. Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến

những sự giúp đỡ quý báu đó. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS. TS.

Hà Văn Huân và ThS. Nguyễn Thị Thu Hằng, thầy giáo và cô giáo đã tận tình

hƣớng dẫn, chỉ bảo trong quá trình thực tập và hoàn thành khóa luận.

Xin gửi lời cảm ơn đến các cán bộ ở Trung tâm Thông tin – Thƣ viện

Trƣờng Đại học Lâm Nghiệp đã cung cấp cho tôi nhiều tài liệu quý báu và cần

thiết có liên quan đến khóa luận.

Mặc dù đã rất cố gắng trong khuôn khổ thời gian và kinh nghiệm còn hạn

chế nên khóa luận chắc chắn không tránh khỏi nhiều thiếu sót. Kính mong nhận

đƣợc những đóng góp quý báu của các thầy giáo, cô giáo, và bạn bè đồng nghiệp

để khóa luận đƣợc hoàn thiện hơn.

Tôi xin chân thành cảm ơn!

Hà Nội, ngày 01 tháng 04 năm 2019

ii

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN ........................................................................................................i

MỤC LỤC.............................................................................................................ii

DANH MỤC BẢNG............................................................................................iv

DANH MỤC HÌNH .............................................................................................. v

ĐẶT VẤN ĐỀ....................................................................................................... 1

PHẦN 1. TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU....................................... 3

1.1. Giới thiệu về cây Đu đủ ................................................................................. 3

1.1.1. Phân loại, nguồn gốc .................................................................................. 3

1.1.2. Phân bố ....................................................................................................... 4

1.1.3. Đặc tính sinh học của lá Đu đủ................................................................... 4

1.1.4. Công dụng của lá Đu đủ trong y dược........................................................ 5

1.2. Các hoạt chất có tác dụng sinh học trong lá Đu đủ........................................ 6

1.2.1. Flavonoid .................................................................................................... 6

1.2.2. Các hợp chất thuộc nhóm axit hữu cơ ........................................................ 9

1.2.3. Các hợp chất có hoạt tính sinh học khác .................................................. 10

1.3. Các nghiên cứu về chiết xuất các chất có hoạt tính sinh học từ lá Đu đủ.... 11

1.3.1. Tình hình nghiên cứu trên thế giới............................................................ 11

1.3.2. Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam ............................................................. 13

PHẦN 2. MỤC TIÊU, NỘI DUNG, PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU............ 15

2.1. Mục tiêu nghiên cứu..................................................................................... 15

2.2. Nội dung nghiên cứu.................................................................................... 15

2.3. Vật liệu nghiên cứu ...................................................................................... 15

2.3.1. Vật liệu thực vật, vi sinh vật...................................................................... 15

2.3.2. Môi trường nuôi cấy vi khuẩn sử dụng trong nghiên cứu ........................ 16

2.3.3. Hóa chất và thiết bị ................................................................................... 16

2.3.4. Địa điểm bố trí thí nghiệm ........................................................................ 17

2.4. Phƣơng pháp nghiên cứu.............................................................................. 17

2.4.1. Phương pháp luận.................................................................................... 17

iii

2.4.2. Phương pháp nghiên cứu cụ thể ............................................................... 17

Phần 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .................................................................... 28

3.1. Kết quả xác định độ ẩm và tạo nguyên liệu bột khô của lá cây Đu đủ........ 28

3.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của các yếu tố công nghệ đến khả năng trích

ly Flavonoid......................................................................................................... 29

3.2.1. Ảnh hưởng của nồng độ Ethanol đến hàm lượng Flavonoid.................... 29

3.2.2. Ảnh hưởng của nhiệt độ đến hàm lượng Flavonoid ................................. 31

3.2.3. Ảnh hưởng của tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi Ethanol đến hàm lượng

Flavonoid............................................................................................................. 31

3.2.4. Ảnh hưởng của thời gian chiết bằng Ethanol đến hàm lượng Flavonoid 32

3.3. Định tính Flavonoid bằng các phản ứng hóa học đặc trƣng ........................ 34

3.4. Kết quả xác định một số đặc tính sinh hóa trong lá Đu đủ:......................... 35

3.4.1. Xác định hàm lượng axit toàn phần.......................................................... 35

3.4.2. Xác định hàm lượng đường tổng............................................................... 36

3.4.3. Xác định hàm lượng vitamin C ................................................................. 37

3.5. Kết quả xác định tính kháng vi sinh vật kiểm định của dịch chiết lá Đu đủ ........ 38

Phần 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ............................................................... 41

4.1. Kết luận ....................................................................................................... 41

4.2. Kiến nghị..................................................................................................... 41

TÀI LIỆU THAM KHẢO................................................................................... 42

PHỤ LỤC............................................................................................................ 46

iv

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1.1. Phân loại và nguồn gốc cây Đu đủ ....................................................... 3

Bảng 2.1. Môi trƣờng LB.................................................................................... 16

Bảng 3.1. Định tính Flavonoid bằng các phản ứng hóa học đặc trƣng............... 34

Bảng 3.2. Kết quả xác định hàm lƣợng đƣờng tổng ........................................... 36

Bảng 3.3. Hoạt tính kháng của một số chủng vi sinh vật kiểm định của dịch chiết

lá Đu đủ ............................................................................................................... 38

v

DANH MỤC HÌNH

Hình 1.1. Lá Đu đủ................................................................................................ 5

Hình 1.2. Cấu trúc của các loại Flavonoid............................................................ 7

Hình 2.1. Các dạng lá của cây Đu đủ.................................................................. 16

Hình 2.1. Quy trình chiết xuất flavonoid toàn phần............................................ 19

Hình 2.2. Đồ thị đƣờng chuẩn glucose................................................................ 24

Hình 3.1. Độ ẩm của lá Đu đủ............................................................................. 28

Hình 3.2. Bột khô của lá cây Đu đủ .................................................................... 29

Hình 3.3. Ảnh hƣởng của nồng độ Ethanol đối với hàm lƣợng Flavonoid ........ 30

Hình 3.4. Ảnh hƣởng của nhiệt độ đến hiệu suất trích ly Flavonoid.................. 31

Hình 3.5. Ảnh hƣởng của tỷ lệ nguyên liệu/ dung môi Ethanol đến hiệu suất

trích ly Flavonoid ................................................................................................ 32

Hình 3.6. Ảnh hƣởng của thời gian chiết bằng Ethanol đến hiệu suất trích ly

Flavonoid............................................................................................................. 33

Hình 3.7. Định tính Flavonoid chiết xuất từ lá Đu đủ ........................................ 34

Hình 3.8. Hàm lƣợng axit toàn phần của lá Đu đủ ............................................. 35

Hình 3.9. Xác định hàm lƣợng đƣờng tổng ........................................................ 36

Hình 3.10. Hàm lƣợng vitamin C trong lá đu đủ ................................................ 37

Hình 3.11. Hoạt tính kháng một số chủng vi sinh vật kiểm định của dịch chiết lá

Đu đủ ................................................................................................................... 39