Nghiên cứu nuôi cấy in vitro cây dương đồng (Adinandra sp.)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM

PHAN THỊ MAI

NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY IN VITRO

CÂY DƯƠNG ĐỒNG (Adinandra sp.)

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

Thái Nguyên, năm 2020

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM

PHAN THỊ MAI

NGHIÊN CỨU NUÔI CẤY IN VITRO

CÂY DƯƠNG ĐỒNG (Adinandra sp.)

Ngành: Sinh học thực nghiệm

Mã số: 8420114

LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC

Người hướng dẫn khoa học: TS. Nguyễn Thị Thu Ngà

Thái Nguyên, năm 2020

i

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi. Mọi trích dẫn trong luận

văn đều ghi rõ nguồn gốc. Các số liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực

và chưa được ai công bố.

Thái Nguyên, tháng 12 năm 2020

Tác giả luận văn

Phan Thị Mai

XÁC NHẬN

CỦA KHOA CHUYÊN MÔN

XÁC NHẬN

CỦA GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN

TS. Nguyễn Thị Thu Ngà

ii

LỜI CẢM ƠN

Lời đầu tiên em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành và sâu sắc tới

TS. Nguyễn Thị Thu Ngà, giảng viên Khoa Sinh học, Trường Đại học Sư phạm - Đại

học Thái Nguyên đã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo và tạo mọi điều kiện giúp đỡ em trong

quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn.

Em xin chân thành cảm ơn các thầy cô trong Bộ môn Sinh học hiện đại và Giáo

dục sinh học, bộ phận Sau đại học thuộc Phòng Đào tạo, Trường Đại học Sư phạm -

Đại học Thái Nguyên đã tạo mọi điều kiện thuận lợi cho em trong quá trình học tập và

hoàn thành luận văn.

Em xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ của cô Trần Thị Hồng, kỹ thuật viên phòng

thí nghiệm Công nghệ tế bào thực vật, các thầy cô kỹ thuật viên các phòng thí nghiệm

Khoa Sinh học - Trường Đại học Sư phạm - Đại học Thái Nguyên đã tạo mọi điều kiện

giúp em trong suốt quá trình nghiên cứu.

Em xin bày tỏ lời biết ơn đến gia đình, đồng nghiệp và bạn bè đã động viên,

khuyến khích và giúp đỡ em trong tiến trình học tập và hoàn thành luận văn.

Thái Nguyên, tháng 12 năm 2020

Tác giả luận văn

Phan Thị Mai

iii

MỤC LỤC

LỜI CAM ĐOAN..........................................................................................................i

LỜI CẢM ƠN.............................................................................................................. ii

MỤC LỤC .................................................................................................................. iii

DANH MỤC BẢNG....................................................................................................iv

DANH MỤC HÌNH .....................................................................................................v

DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT..................................................................................vi

MỞ ĐẦU.......................................................................................................................1

1. Lý do chọn đề tài .......................................................................................................1

2. Mục tiêu nghiên cứu ..................................................................................................2

3. Nội dung nghiên cứu...................................................................................................2

Chương 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU.........................................................................3

1.1. Giới thiệu về thực vật thuộc chi Dương đồng (Adinandra)....................................3

1.1.1. Nguồn gốc và phân loại .......................................................................................3

1.1.2. Đặc điểm sinh học................................................................................................4

1.1.3. Giá trị dược liệu của chi Dương đồng .................................................................4

1.2. Nghiên cứu sử dụng mã vạch DNA trong phân loại thực vật ................................5

1.2.1. Một số thành tựu sử dụng mã vạch DNA trong phân loại thực vật.....................7

1.2.2. Một số thành tựu sử dụng mã vạch DNA trong phân loại các loài thuộc họ

Chè (Theaceae).............................................................................................................9

1.3. Kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật...................................................................10

1.3.1. Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào thực vật ..............................................10

1.3.2. Một số thành tựu trong nuôi cấy in vitro ...........................................................11

Chương 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ..............................18

2.1. Vật liệu, địa điểm và thời gian nghiên cứu...........................................................18

2.1.1. Vật liệu nghiên cứu............................................................................................18

2.1.2. Hóa chất, thiết bị................................................................................................18

2.1.3. Địa điểm và thời gian nghiên cứu......................................................................19

2.2. Các phương pháp nghiên cứu ...............................................................................20

2.2.1. Phương pháp sinh học phân tử...........................................................................20

2.2.2. Phương pháp nuôi cấy in vitro...........................................................................21

2.2.3. Phương pháp phân tích và xử lý số liệu.............................................................25

Chương 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ................................................................26

3.1. Nghiên cứu định danh mẫu cây thuộc chi Dương đồng bằng DNA barcode .......26

3.1.1. Kết quả tách chiết DNA tổng số ........................................................................26

3.2.2. Kết quả khuếch đại và phân tích trình tự nucleotide vùng gen sử dụng cặp mồi ITS2

và ITS4..........................................................................................................................26

3.2. Nghiên cứu môi trường nuôi cấy in vitro mẫu cây thuộc chi Dương đồng..........30

3.2.1. Nghiên cứu công thức khử trùng tạo mẫu sạch .................................................30

3.2.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BAP và nước dừa đến sự sinh trưởng của

mẫu cây Dương đồng...................................................................................................36

3.2.3. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của GA3 đến sự sinh trưởng của mẫu cây Dương

đồng..............................................................................................................................43

3.2.4. Nghiên cứu khả năng tạo rễ cây Dương đồng ...................................................45

KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ...................................................................................51

1. Kết luận....................................................................................................................51

2. Kiến nghị..................................................................................................................51

CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN................52

TÀI LIỆU THAM KHẢO.........................................................................................53

PHỤ LỤC........................................................................................................................