Nghiên cứu khả năng tái sinh in vitro ở một số giống lúa và xây dựng quy trình chuyển gen thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM

NGUYỄN VĂN THÀNH

NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH IN VITRO Ở

MỘT SỐ GIỐNG LÚA VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH

CHUYỂN GEN THÔNG QUA VI KHUẨN

Agrobacterium tumefaciens

LUẬN VĂN THẠC SĨ

CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Thái Nguyên - 2020

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM

NGUYỄN VĂN THÀNH

NGHIÊN CỨU KHẢ NĂNG TÁI SINH IN VITRO Ở

MỘT SỐ GIỐNG LÚA VÀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH

CHUYỂN GEN THÔNG QUA VI KHUẨN

Agrobacterium tumefaciens

Ngành: Công nghệ sinh học

Mã số ngành: 8. 42. 02. 01

LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Người hướng dẫn khoa học: TS. NGUYỄN XUÂN VŨ

Thái Nguyên - 2020

i

LỜI CAM ĐOAN

Em xin cam đoan số liệu và kết quả nghiên cứu đề tài “ Nghiên cứu khả năng

tái sinh in vitro ở một số giống lúa và xây dựng quy trình chuyển gen thông qua vi

khuẩn Agrobacterium tumefaciens” là trung thực, được thực hiện tại Khoa Công

nghệ Sinh học và Công nghệ Thực phẩm – Trường Đại học Nông Lâm- Đại học Thái

Nguyên. Ngoài ra, trong bài báo cáo có sử dụng một số nguồn tài liệu tham khảo đã

được trích dẫn rõ ràng và được phép công bố.

Em xin hoàn toàn chịu trách nhiệm về tính trung thực của các nội dung khác

trong đề tài của mình.

Học viên

ii

LỜI CẢM ƠN

Trong quá trình học tập và hoàn thành luận văn tốt nghiệp, em đã nhận được

sự giúp đỡ về nhiều mặt của các cấp lãnh đạo, các tập thể và các cá nhân.

Trước tiên, em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến giáo viên hướng dẫn

T.S Nguyễn Xuân Vũ đã luôn tận tình hướng dẫn, giúp đỡ em trong suốt quá trình

thực hiện và hoàn thành luận văn này.

Em xin bày tỏ lời cảm ơn đến Khoa Công nghệ Sinh học và Công nghệ Thực

phẩm cùng các cán bộ, quý đồng nghiệp đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn

thành đề tài nghiên cứu này.

Cuối cùng em xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc nhất tới gia đình,

người thân và bạn bè đã động viên, giúp đỡ em trong suốt quá trình học tập và thực

hiện đề tài.

Em xin chân thành cảm ơn!

Thái Nguyên, tháng 11 năm 2020

Học Viên

iii

DANH MỤC TỪ VÀ THUẬT NGỮ VIẾT TẮT

Từ, thuật ngữ

viết tắt

Nghĩa đầy đủ của từ, thuật ngữ

(cả tiếng Anh và tiếng Việt)

CT Công thức

LSD Least Singnificant Difference Test – Sai khác nhỏ nhất có ý nghĩa

CV Coeficient of Variation – Hệ số biến động

MT Môi trường

TN Thí nghiệm

AS Acetosyringone

LB Left border- ranh giới trái

RB Right border-ranh giới phải

MS Murashige Skoog

iv

DANH MỤC BẢNG

Bảng 1.1: Diện tích lúa gieo trồng từ năm 2015 - 2019 ...............................................9

Bảng 1.2. Sản lượng lúa từ năm 2015 - 2019 ...............................................................9

Bảng 2.1. Danh mục giống nghiên cứu ......................................................................19

Bảng 3.1. Ảnh hưởng của NaOCl 3% tới hiệu quả khử trùng mẫu

(sau 7 ngày nuôi cấy)..................................................................................................29

Bảng 3.2. Ảnh hưởng của môi trường nuôi cấy đến khả năng tạo mô sẹo

của một số giống lúa ...................................................................................................30

Bảng 3.3. Ảnh hưởng của 2,4-D đến tỷ lệ tái sinh mô sẹo ở một số giống lúa

(sau 14 ngày)...............................................................................................................33

Bảng 3.4. Ảnh hưởng của BAP đến khả năng tái sinh chồi một số giống lúa............34

Bảng 3.5. Ảnh hưởng của kinetin đến khả năng tái sinh ở một số giống lúa .............35

Bảng 3.6. Ảnh hưởng của tuổi mô sẹo đến khả năng tiếp nhận gen GUS

của một số giống lúa ...................................................................................................37

Bảng 3.7. Ảnh hưởng của chủng vi khuẩn đến hiệu quả chuyển gen ở một số

giống lúa......................................................................................................................39

Bảng 3.8. Ảnh hưởng của nồng độ AS đến khả năng tiếp nhận gen GUS

của một số giống lúa ...................................................................................................40

Bảng 3.9. Ảnh hưởng của thời gian lây nhiễm đến hiệu quả chuyển gen ..................42

Bảng 3.10. Ảnh hưởng của thời gian đồng nuôi cấy đến hiệu quả chuyển gen .........43

Bảng 3.11. Ảnh hưởng của nồng độ hygromycin đến hiệu quả chọn lọc mô sẹo

chuyển gen ..................................................................................................................44