Fish word 1 Vi sinh vật môi trường

MỤC LỤC

Trang

A. Giới thiệu về kĩ thuật Fish....................................................................................2

B. Phương pháp thực hiện Fish................................................................................3

I- Quy trình thực hiện.......................................................................................3

1.1 Tóm tắt quy trình thực hiện.................................................................3

1.2. Lựa chọn đầu dò đánh dấu huỳnh quang............................................4

..............................................................................................................

1.3. Chuẩn bị mẫu và xử lý sơ bộ..............................................................8

..............................................................................................................

1.4. Lai giữa đầu dò và trình tự đích đặc hiệu............................................9

1.5. Quan sát và xử lý tín hiệu.................................................................10

II- Những trở ngại đối với kĩ thuật Fish...........................................................12

2.1. Kết quả không chính xác..................................................................12

2.1.1. các chất tự phát huỳnh quang…………………………………...12

2.1.2 Đầu dò thiếu tính đặc hiệu………………………………………..13

2.2 Kết quả âm tính.................................................................................13

2.2.2. Do những cấu trúc phức tạp của đầu dò hay trình tự đích……....13

2.2.3. Hàm lượng ARN thấp..…………………………………………..14

2.3.4. Ảnh chụp bị mất màu…………………………………………….14

III- Biện pháp khắc phục…………………………………………………….....15

C. Ứng dụng của kĩ thuật Fish……………………………………..………………16

I. Hệ vi sinh vật trong nước thải…………………………………………...…16

II. Vi khuẩn cộng sinh…………………………………………………………17

III. Trong Y học……………………………………………………………..…18

III.1. Các quần thể vi khuẩn phức tạp……………………………………..18

III.2. Phát hiện mầm bệnh trong các mô cấy và dụng cụ vô trùng………..22

III.3. Nấm………………...………………………………………………..23

III.4. Thuốc thú Y…………………...…………………………………….24

III.5. Các mầm bệnh ở thực vật……………………………………………24

D.Triển vọng và phát triển của Fish……………..……………………………….25

I. Trên thế giới………………………………………………………………..25

II. Tại Việt Nam……………………………………………………………….29

1

E. Tài liệu tham khảo..............................................................................................31

2

A. GIỚI THIỆU VỀ KĨ THUẬT FISH.

FISH là một kỹ thuật cho phép hiển thị, nhận dạng, liệt kê và định vị các tế bào vi

khuẩn. FISH không chỉ cho phép nhận ra các vi sinh vật quen thuộc, đã biết môi trường

nuôi cấy đặc hiệu mà còn xác định được các vi sinh vật lạ, chưa biết rõ về điều kiện và

môi trường nuôi cấy, do đó FISH có thể giúp chúng ta biết rõ về hệ thống phức tạp của

các quần thể vi sinh vật. FISH kết hợp sự chính xác của các kỹ thuật di truyền phân tử và

sự quan sát trực quan từ kính hiển vi, cho phép hình dung và nhận biết các tế bào vi

khuẩn trong môi trường tự nhiên hay trong các mô bệnh. Độ nhạy và tốc độ thực hiện là

những đặc điểm nổi bật đã giúp FISH trở thành công cụng hiến cứu hữu hiệu nhất.

Trên thế giới, FISH được sử dụng trong việc mô tả quần thể vi sinh vật trong môi

trường tự nhiên, nổi bật là hệ vi sinh vật ở trầm tích biển Wadden, tại vịnh hẹp ở Na-uy,

sinh vật phù du ở sông hoặc biển, tuyết hồ trên núi cao, trong đất và trên bề mặt rễ thực

vật. FISH đặc biệt phổ biến trong y học, ngoài mục đích xác định các mầm bệnh có

nguồn gốc từ vi khuẩn (các bệnh về đường hô hấp, tiêu hóa, các bệnh lây qua đường máu,

ung thư…) FISH còn được sử dụng để chẩn đoán thường qui sự bất thường về cấu trúc và

số lượng nhiễm sắc thể (trước sinh và sau sinh) của thai nhi.

Ở Việt Nam những nghiên cứu sử dụng FISH còn hạn chế, chủ yếu là ứng dụng trong

chẩn đoán các bệnh về di truyền. Do đó việc đẩy mạnh phát triển kỹ thuật này ở nước ta

trong tương lai sẽ mở ra một bước tiến mới trong việc nghiên cứu và chẩn đoán vi sinh

vật so với phương pháp nuôi cấy cổ điển.

3