Thư viện tri thức trực tuyến
Kho tài liệu với 50,000+ tài liệu học thuật
© 2023 Siêu thị PDF - Kho tài liệu học thuật hàng đầu Việt Nam
Biểu hiện và tinh chế interleukin-2 của người tỏng nấm men Pichia pastoris
Nội dung xem thử
Mô tả chi tiết
Tap chi Cong nghe Sinh hoc 8(3): 291-295, 2010
BIEU HIEN VA TINH CHE INTERLEUKIN-2 CUA NGUCJI TRONG NAM MEN PICHIA
PASTORIS
Le Thi Lan Anh, Biii Khanh Chi, Vu Minh Dire, Le Thj Thu Hdng, Le Van Trucmg, Trln Ngoc Tan,
TruoTig Nam Hai
Vien Cong nghe sinh hoc
TOM TA T
Interleukin-2 ciia ngu'di (hIL-2) la mot cytokine quan trong trong y hoc de ho frg dieu tri benh ung thu va
mot so benh suy giam mien dich khac. Cytokine nay da dugc tao ra bang con duo'ng tai to hgp vdi nhieu he
bieu hien khac nhau. De tao san pham IL-2 tai to hgp tai Viet Nam, gen il-2 da dugc dinh huong bieu hien
trong nhieu he bieu hien khac nhau nhu te bao vi khuan, te bao nam men. Cong trinh nghien ciru nay trinh bay
ket qua ciia viec bieu hien san pham lL-2 tai to hgp trong te bao nhan chuan: nam men Pichia pastoris. De bieu
hien dugc gen (7-2 dang dan trong te bao nam men P. pastoris, plasmid pIC9 dugc sir dung lam vector bieu
hien. Dua tren vj tri cat ciia hai enzyme han che SnaBl va Notl, vector bieu hien pIC9-il-2 dugc tao thanh va
dugc dung hgp vao he gen ciia nam men P. pastoris qua diem cat ciia Sail. Ket qua bieu hien tren moi trudng
BMMY cho thay, lL-2 tai to hgp da dugc bieu hien ra ngoai moi tru'dng vdi hieu suat cao (0,3 g/L) dua tren su
CO mat ciia nguon carbon methanol (1%). IL-2 tai to hgp dugc tinh sach biing cot trao doi anion ANX su dung
he thong sac ky long nhanh (FPLC). San pham rhlL-2 tinh sach cuoi ciing cho dp sach chua cao nhung la ca sd
de kiem tra vii so sanh boat tinh sinh hpc cua IL-2 tir cac he bieu hien khac nhau.
Tif khoa: Bieu hien. cot ANX, interleukin-2, pPIC9, Pichia pastoris. tinh sach protein
DAT VAN DE
Trong ca the ngudi, Interleukin-2 (hIL-2) la mdt
trong cac cytokine quan trgng ddi vdi he mien djch.
Loai cytokine nay da va dang dugc sii' dung trong y
hgc cho nhieu muc dich khac nhau nhu hd trg dieu
trj cho mdt sd dang ung thu nhu ung thu than, u hac
td da hoac hd trg dieu trj cho benh nhan suy giam
mien dich. Hien nay, d Viet Nam, Interleukin-2 ciia
ngudi da dugc bieu hien thanh cdng dudi dang
protein tai td hgp (Biii Thj Huyen et al, 2005; Tran
Nggc Tan et al, 2009). Tren the gidi, Interleukin-2
da dugc bieu hien thanh cdng tren nhieu he bieu hien
khac nhau nhu trong E. coli (Esfandiar, 2010) hay
trong nam men (Yan Liu et al, 2006).
Trong thuc te tai cac benh vien d Viet Nam, viec
sir dung rhIL-2 trang chii'a trj ung thu van cdn rat xa
la. Nd khdng nhung vugt qua kha nang chi tra cua
ngudi dan ma cdn la lieu phap mien dich mdi chua
dugc ap dung tai Viet Nam. Tir thuc te dd, ciing cd
mot sd cdng trinh khoa hgc trong nude da nghien
ciru bieu hien dugc rhIL-2 (Biii Thi Huyen et al.
2005; Trln Thj Hudng et al; 2006). Tuy nhien. cac
cdng trinh nay mdi chi diing lai d viec bieu hiSn ma
chua thuc su tao dugc san pham rhlL-2 dang tinh
khilt, dii dieu kien ap dung tren ngudi.
Ddi vdi cac rhIL-2 thuang mai hien nay, hlu hit
deu dugc bieu hien trong te bao vi khuan
Escherichia coli d dang khdng tan. De thu dugc san
pham rhIL-2 cd boat tinh, nhat thiet phai cd budc hdi
tinh trong qua trinh tinh che. Budc hdi tinh nay la
nguyen nhan chinh lam giam hieu qua ve san lugng
va chat lugng san pham rhIL-2 tao ra. De kliac phuc
ban che dd, cac gen cd ngudn gdc tir te bao bac cao
nhu /7-2 dugc bieu hien trong te bao nam men P.
pastoris thudng cho san pham protein cd hoat tinh
sinh hgc tdt ban khi bieu hien trong te bao vi khuan.
Chinh qua trinh cai bien sau djch ma da giiip cho sir
gap nep va tao cau tnic khdng gian cua protein bieu
hien phii hgp ban. Vi ly do tren, ngoai viec bieu hien
tren he te bao vi khuan (Tran Nggc Tan et cd., 2009),
phuang an bieu hien rhlL-2 trang te bao P. pastoris
ciing dugc tien hanh vdi mong mudn san xuat dugc
san pham rhIL-2 vdi boat tinh sinh hgc tdt hon va
hieu qua ban. Cdng trinh nghien ciru nay se trinh bay
ket qua da dat dugc trong qua trinh bieu hien gen ;7-
2 trong te bao P. pastoris SMDl 168 va tinh che san
pham rhIL tir qua trinh bieu hien do.
VAT LIEU VA PHUONG PHAP
Vat lieu
Chiing vi sinh vat
Chiing E. coli DH5a dugc sir dung lam chung
291