Thí nghiệm hóa sinh và thực hành MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP TỦA PROTEIN Hỗ trợ dowload tài liệu 123doc qua

KHOA CN SINH HỌC – MÔI TRƯỜNG THÍ NGHIỆM HÓA SINH

MỘT SỐ PHƯƠNG PHÁP TỦA PROTEIN

I. Phương pháp tủa bằng các tác nhân gây tủa là dung môi hữu cơ (Ethanol 80%,

Aceton)

Độ hòa tan của protein trong dung dịch phụ thuộc vào nhiều yếu tố, một trong số đó

là hằng số điện môi của dung dịch. Nhìn chung, những phân tử dung môi có hằng số điện

môi lớn (như nước, dimethylsulphoxid) có thể ổn định tương tác giữa chúng với các phân tử

protein và tạo điều kiện thuận lợi cho sự hòa tan của protein trong dung dịch. Ngược lại, các

dung môi với hằng số điện môi nhỏ (aceton, ethanol…) ngăn cản sự phân tán của các phân

tử protein trong môi trường. Do đó, độ hòa tan của những phân tử protein giảm và xảy ra kết

tủa do sự làm giảm hằng số điện môi hiện hữu của môi trường. Điều này có được bằng cách

thêm một dung môi hòa tan trong nước như aceton vào dung dịch chứa protein. Sự tủa bằng

aceton hoặc ethanol 80% có nhiều thuận lợi hơn vì nó tương đối rẻ, có sẵn ở dạng tinh khiết

với ít chất tạp nhiễm gây độc hay ức chế đối với enzym, do nhiệt độ bay hơi của dung môi

thấp nên dễ tách bỏ dung môi khỏi chế phẩm enzym bằng phương pháp sấy nhẹ bằng quạt

gió.

II. Phương pháp tủa bằng muối

Người ta có thể dùng muối (NH4)2SO4, NaCl… để tủa protein vì các muối này vừa

làm trung hòa điện (do các ion tác động tương hỗ với các nhóm tích điện trái dấu), vừa loại

bỏ lớp vỏ hydrat của phân tử protein. Các protein khác nhau có thể bị kết tủa với nồng độ

muối khác nhau, vì vậy có thể dùng muối để tách riêng các protein ra khỏi hỗn hợp của

chúng.

Phần thí nghiệm

1. Dụng cụ và hóa chất

Dụng cụ

Pipet 5ml, 10ml

Becher 50ml, 100ml, 250ml

Bình tia

Máy ly tâm

Hóa chất

Nguyên liệu thơm (dứa)

Etanol 96%

Muối (NH4)2SO4

2. Thực hành

Cân khoảng 80g đến 100g thơm, giã nát vắt lấy nước rồi ly tâm ở 6000 vòng/phút

trong 15 phút rồi đong xem thể tích của nước thơm là bao nhiêu, ghi nhận thể tích V. Sau đó

chia đôi thể tích V nước thơm vùa thu được thành hai phần bằng nhau rồi tiến hành tủa

protein bắng hai tác nhân tủa khác nhau: Ethanol 80% và muối (NH4)2SO4

1