Thư viện tri thức trực tuyến
Kho tài liệu với 50,000+ tài liệu học thuật
© 2023 Siêu thị PDF - Kho tài liệu học thuật hàng đầu Việt Nam
TẠO KHÁNG THỂ ĐA DÒNG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH ELISA pdf
Nội dung xem thử
Mô tả chi tiết
TẠO KHÁNG THỂ ĐA DÒNG VÀ XÂY DỰNG QUI TRÌNH ELISA
TÓM TẮT
Đặt vấn đề: Ngộ độc thực phẩm hiện nay liên quan nhiều rất sự ô nhiễm
Staphylococcus aureus và độc tố của chúng gây ra trong những năm gần đây. Do đó
thiết lập qui trình ELISA để phát hiện độc tố là một nhu cầu cần thiết hiện nay.
Mục tiêu nghiên cứu: Tạo kháng thể đa dòng và khảo sát các thông số kỹ
thuật của qui trình ELISA sandwich xây dựng bộ kít phát hiện độc tố ruột nhóm A
của Staphylococcus aureus.
Phương pháp nghiên cứu: Sử dụng các kỹ thuật gây miễn dịch trên thỏ thu
nhận kháng thể, kỹ thuật tinh chế kháng thể và cộng hợp kháng thể để làm nguyên vật
liệu cho nghiên cứu qui trình kỹ thuật ELISA sandwich phát hiện độc tố ruột nhóm A
của Staphylococcus aureus.
Kết quả nghiên cứu: Kháng thể sau khi gây miễn dịch trên thỏ được tinh chế
và thu được 700l, với nồng độ 16860 g/ml. Kháng thể này được cộng hợp với
enzym HRP, và sử dụng để thực hiện quy trình ELISA sandwich với độ pha loãng là
3.200 lần trong PBS buffer. Các thông số của qui trình ELISA sandwich đối với độ
tố ruột nhóm A là: - Quá trình phủ giếng + Dung dịch phủ giếng là Carbonate buffer
pH 9,5. + Nồng độ kháng thể kháng độc tố A phủ giếng là 5 g/ ml. + Ủ ở nhiệt độ
phòng trong 3 giờ. - Quá trình khóa giếng. + Khóa giếng bằng sữa gầy 1%. + Ủ ở 4oC
trong 30 phút. - Quá trình ủ với độc tố + Độc tố được pha loãng trong PBS buffer. +
Ủ ở 37oC trong 2 giờ. - Quá trình ủ với kháng thể thứ cấp. + Kháng thể đánh dấu
HRP được pha loãng 1/3.200 trong PBS buffer. + Ủ ở 25oC trong 1 giờ. - Đọc kết
quả: Đọc kết quả bằng dung dịch phát màu 2,2’-azino-di (3-ethyl-benzonthiazoline-6-
sulfonic acid) (ABTS) ở bước sóng 405nm. - Đánh giá các thông số kỹ thuật của
phương pháp mới so với phương pháp tham chiếu với kết quả: độ nhạy 100%, độ đặc
hiệu 93%, tỷ lệ âm tính giả 0%, tỷ lệ dương tính giả 6,25% và độ tương đồng của thử
nghiệm là 95,5%
Kết luận: Bộ kit có thể dùng để phát hiện độc tố ruột nhóm A của
Staphylococcus aureus..
ABSTRACT
PRODUCTION OF POLYCLONAL ANTIBODIES AND SET UP THE
ELISA PROCEDURE
TO DETECT STAPHYLOCOCCAL ENTEROTOXIN A
Nguyen Do Phuc, Trần Linh Thước, et al
* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 12 - Supplement of No 4 - 2008: 272 - 27