Tài liệu HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α pot

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC



BÙI THỊ THANH TỊNH

HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN

DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α

LUẬN VĂN KỸ SƢ

CHUYÊN NGÀNH: CÔNG NGHỆ SINH HỌC

Thành phố Hồ Chí Minh

2006

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO

TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH

BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC



HOÀN THIỆN QUY TRÌNH BIẾN NẠP ĐOẠN

DNA VÀO TẾ BÀO VI KHUẨN E. coli DH5α

Giáo viên hƣớng dẫn: Sinh viên thực hiện:

TS. LÊ ĐÌNH ĐÔN BÙI THỊ THANH TỊNH

NIÊN KHÓA: 2002-2006

Thành phố Hồ Chí Minh

2006

MINISTRY OF EDUCATION AND TRAINING

NONG LAM UNIVERSITY,HCHC

DEPARTMENT OF BIOTECHNOLOGY



COMPLETING PROTOCOL OF

TRANSFORMATION DNA FRAGMENTS INTO

E.coli DH5α BACTERIAL CELLS

GRADUATION THESIS

MAJOR: BIOTECHNOLOGY

Professor Student

Dr. LE ĐINH ĐON BUI THI THANH TINH

TERM: 2002 - 2006

HCMC, 09/2006

i

LỜI CẢM ƠN

Con xin thành kính ghi ơn cha mẹ. Cha mẹ, anh chị và ngƣời thân luôn là chỗ

dựa vững chắc về tinh thần và vật chất cho con.

Em vô cùng biết ơn thầy Lê Đình Đôn đã tận tình hƣớng dẫn và truyền đạt cho

em những kinh nghiệm quý báu trong suốt thời gian làm đề tài.

Em xin gửi lời cảm ơn đến:

Ban giám hiệu Trƣờng Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, ban chủ nhiệm Bộ

môn Công Nghệ Sinh Học đã tạo điều kiện thuận lợi cho em trong thời gian học tập

vừa qua.

Ban giám đốc Trung tâm Phân Tích Hóa Sinh - Trƣờng Đại học Nông Lâm TP.

Hồ Chí Minh cùng toàn thể các anh chị tại Trung Tâm đã tạo điều kiện thuận lợi tối đa

cũng nhƣ tận tình giúp đỡ em trong thời gian thực tập tốt nghiệp.

Anh Nguyễn Văn Lẫm đã tận tình hƣớng dẫn, giúp đỡ em trong suốt quá trình

làm đề tài

Các anh, chị và các bạn sinh viên thực tập tại phòng 105, 118 - khu Phƣợng Vỹ

Trƣờng Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh đã giúp đỡ tôi.

Và cuối cùng là các bạn lớp Công Nghệ Sinh Học K28 đã luôn đồng hành, chia

sẻ vui buồn, động viên và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập và làm đề tài.

TP. Hồ Chí Minh, tháng 8 năm 2006

Bùi Thị Thanh Tịnh

ii

TÓM TẮT

BÙI THỊ THANH TỊNH, Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh, “Hoàn thiện

quy trình biến nạp đoạn DNA vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α”, đƣợc thƣc hiện

tại Trung tâm Phân Tích Thí Nghiệm Hóa Sinh và Bộ môn Bảo Vệ Thực Vật-Trƣờng

Đại học Nông Lâm TP. Hồ Chí Minh.

Giáo viên hƣớng dẫn: thầy Lê Đình Đôn.

Đề tài đƣợc thực hiện từ tháng 02 năm 2006 đến tháng 08 năm 2006 với các nội

dung:

Hoàn thiện phƣơng pháp chuẩn bị tế bào khả nạp theo phƣơng pháp sử dụng

hoá chất.

Hoàn thiện quy trình biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn E. coli DH5α..

Hoàn thiện quy trình chiết tách plasmid, phản ứng cắt plasmid để kiểm tra.

Thiết lập phản ứng phủ đầu bằng cho đoạn DNA từ phản ứng PCR và plasmid sau khi

cắt.

Thiết lập phản ứng chèn đoạn DNA vào plasmid pBluescript.

Kết quả thu đƣợc nhƣ sau:

Thiết lập đƣợc quy trình chuẩn bị tế bào khả nạp sử dụng hoá chất, tế bào khả

nạp có thể giữ ở -70oC với glycerol trong thời gian 2 tháng.

Biến nạp plasmid vào vi khuẩn E. coli DH5α.

Chiết tách plasmid không lẫn tạp theo quy trình của Sambrook và cộng sự có

sửa đổi.

iii

MỤC LỤC

Trang

Lời cảm ơn...................................................................................................................i

Tóm tắt........................................................................................................................ii

Mục lục ......................................................................................................................iii

Danh sách các chữ viết tắt ........................................................................................vii

Danh sách các hình ...................................................................................................vii

Danh sách các bảng ...................................................................................................ix

PHẦN 1. MỞ ĐẦU ....................................................................................................1

1.1 Đặt vấn đề.............................................................................................................1

1.2 Mục tiêu của đề tài................................................................................................2

1.3 Nội dung thực hiện ...............................................................................................2

PHẦN 2. TỔNG QUAN TÀI LIỆU...........................................................................3

2.1 Hiện tƣơng biến nạp ở vi khuẩn ...........................................................................3

2.1.1 Giới thiệu về hiện tƣợng biến nạp................................................................3

2.1.2 Cơ sở sinh hóa và tế bào học của hiện tƣợng biến nạp................................3

2.1.3 Cơ chế của hiện tƣợng biến nạp...................................................................5

2.1.4 Vai trò của hiện tƣợng biến nạp...................................................................5

2.1.5 Ứng dụng của hiện tƣợng biến nạp..............................................................5

2.2 Các vector và chủng chủ dùng trong biến nạp .....................................................6

2.2.1 Khái niệm chung các vector.........................................................................6

2.2.2 Plasmid.........................................................................................................7

2.2.2.1 Cấu trúc ...............................................................................................7

2.2.2.2 Tính chất của plasmid..........................................................................8

2.2.2.3 Phân loại plasmid ................................................................................8

2.2.3 Phage............................................................................................................9

2.2.4 Chủng chủ E.coli..........................................................................................9

2.3 Các ezyme dùng trong biến nạp .........................................................................10

2.3.1 Các enzym cắt giới hạn (RE).....................................................................11