Phương pháp điện di Hỗ trợ dowload tài liệu 123doc qua thẻ cào liên hệ Zalo: 0587998338

Mạc Văn Trọng

[email protected] or [email protected]

1

MỞ ĐẦU

Ở mọi cơ thể sinh vật, vật chất sống được cấu tạo từ các đại phân tử sinh học,

trong đó quan trọng nhất là nucleic acid và protein. Các nucleic acid đóng vai trò

quan trọng trong sự lưu trữ và truyền đạt thông tin di truyền cho thế hệ sau. Hơn nữa,

các thông tin này sẽ được biểu hiện trên cơ thể thông qua sự tạo thành các phân tử

protein. Trong các quá trình sao chép cũng như tổng hợp protein luôn xuất hiện

nhiều biến đổi, đây chính là nguồn gốc của sự tiến hóa và tính đa dạng của sinh giới.

Vì vậy việc tìm hiểu, phân tích các phân tử DNA, RNA là rất cần thiết. Khi hiểu rõ

cấu trúc, đặc điểm của các đại phân tử này, chúng ta có thể kết hợp với sự phát triển

các kỹ thuật, các công nghệ hiện đại để tiến hành lai tạo, chọn giống mới, sản xuất

các hợp chất thứ cấp dùng trong y học, sản xuất các chất kháng sinh…..

Có rất nhiều kỹ thuật được ứng dụng trong công nghệ sinh học để nghiên cứu

vật chất sống, trong đó điện di là một kỹ thuật rất hữu ích sử dụng nhằm phân tích,

xác định và tinh sạch các đoạn DNA bằng cách dựa vào sự dịch chuyển của chúng

trong môi trường điện trường.

Mạc Văn Trọng

[email protected] or [email protected]

2

NỘI DUNG

I. NGUYÊN TẮC CHUNG

Điện di là hiện tượng dịch chuyển của các phân tử tích điện dưới tác động

của điện trường, hay nói cách khác là kỹ thuật phân chia các phân tử DNA, RNA,

protein dựa trên các đặc điểm vật lý như khối lượng hay điện tích thực của chúng.

Khi các phân tử tích điện được đặt trong một điện trường, chúng sẽ dịch

chuyển về các cực (+) hoặc (-) tùy theo điện tích của chúng. Protein có điện tích

thực hoặc dương hoặc âm, còn các nucleic acid có một điện tích âm không đổi nhờ

khung phosphate của mình và vì thế chỉ dịch chuyển hướng đến cực dương.

Các phân tử protein và nucleic acid có thể được chạy điện di trên một khuôn

đỡ (support matrix) như giấy, cellulose acetate, gel tinh bột, agarose hoặc

polyacrylamide gel. Tuy nhiên, kỹ thuật điện di trên giá rắn (agarose hoặc

polyacrylamide) được sử dụng phổ biến nhất. Kỹ thuật này sử dụng một dung dịch

đệm để dẫn điện và tạo điện trường đều, một bản gel để phân tách các phân tử và

các chất nhuộm khác nhau để phát hiện vị trí các phân tử trên gel sau khi điện di.

Trong đó, polyacrylamide gel được dùng để phân tách các phân tử protein và các

phân tử DNA có chiều dài <1 kb, còn agarose gel phân tách hiệu quả các phân tử

DNA hoặc RNA có kích thước từ 20 bp-20 kb.

II. ĐIỆN DI AGAROSE GEL

Agarose có khối lượng phân tử xấp xỉ 120.000 Da, là một trong hai thành

phần chính của agar chiếm khoảng 70%, phần kia là agaropectin chiếm khoảng 30%.

Agarose là một polymer mạch thẳng không bị sulphate hóa chứa hai gốc xen kẽ

nhau là D-galactose và 3,6-anhydro-L-galactose.

Agarose gel là một chất trong suốt hoặc trong mờ, tạo thành khi hỗn hợp

agarose và nước (hoặc đệm điện di) được đun nóng tới >100 oC và sau đó được làm

lạnh; dạng gel xuất hiện ở khoảng 40-45 oC. Bản chất quá trình đông lại của agarose

là phản ứng trùng hợp gắn nhiều gốc monomer tạo thành polymer nhờ nhiệt độ. Các