Nghiên Cứu Xác Định Các Đoạn Dna Barcode Cho Loài Tràm Năm Gân Melaleuca Quinquenervia Phục Vụ Giám Định Loài

LỜI CẢM ƠN

Để hoàn thành được khóa luận này, với lòng biết ơn sâu sắc nhất, tôi xin

chân thành cảm ơn quý thầy cô Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp- Trường

Đại học Lâm nghiệp đã giúp đỡ và chỉ bảo tận tình tôi trong quá trình thực hiện

khóa luận tại trường, đặc biệt là sự giúp đỡ của các thầy cô bên bộ môn Công

nghệ gen và Di truyền phân tử của Viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp.

Tôi xin chân thành cảm ơn PGS TS Hà V n Huân và TS i Th M i

Hương đã trực tiếp hướng dẫn, chỉ bảo và giúp đỡ tôi thực hiện đề tài khóa luận

tốt nghiệp Đặ iệt, kh luận này nhận được sự hỗ trợ từ Đề tài cấp Nhà nước

"Xây dựng ơ sở dữ liệu mã vạch DNA (DNA barcode) cho một số loài cây lâm

nghiệp gỗ lớn, lâm sản ngoài gỗ có giá tr kinh tế" do PGS TS Hà V n Huân

làm Chủ nhiệm.

Cuối cùng tôi xin gửi lời cảm ơn hân thành nhất đến thầy , gi

đình, ạn bè - những người đã động viên, khích lệ tôi suốt quá trình học tập, rèn

luyện và thực hiện khóa luận tốt nghiệp.

Do trong quá trình thực hiện còn có nhiều hạn chế về mặt thời gian, kiến

thức và kinh nghiệm vì vậy không tránh khỏi những thiếu sót nhất đ nh. Tôi rất

mong nhận được những ý kiến đ ng g p ủa thầy cô và các bạn để khóa luận tốt

nghiệp củ t i được hoàn thiện hơn

Tôi xin chân thành cảm ơn !

Hà Nội, ngày 24 tháng 5 n m 2019

Sinh viên thực hiện

Vũ Thị Huyền Dịu

MỤC LỤC

Lời cảm ơn................................................................................................................................................1

MỤC LỤC ..................................................................................................................................................2

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ..........................................................................................................................4

DANH MỤC CÁC BẢNG.............................................................................................................................6

DANH MỤC CÁC HÌNH..............................................................................................................................7

ĐẶT VẤN ĐỀ..............................................................................................................................................1

CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU..........................................................................................................2

1.1. Tổng quan về đối tượng nghiên cứu.................................................................................................2

1.1.1. Nguồn gốc và phân bố của Tràm năm gân.....................................................................................2

1.1.2. Đặc điểm hình thái .........................................................................................................................2

1.1.3. Giá trị sử dụng................................................................................................................................3

1.2. Tổng quan về mã vạch DNA (DNA barcode)......................................................................................4

1.2.1. Giới thiệu về mã vạch DNA ............................................................................................................4

1.2.2. C c đặc điểm cơ ản của tr n t N arc ............................................................................5

1.2.3. t ố c được ử ụng tr ng ương N arc t c t...................................7

CHƯƠNG 2: ỤC TIÊU, NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU................................ 12

2.1. Mục tiêu nghiên cứu ...................................................................................................................... 12

2.2. N i dung nghiên cứu...................................................................................................................... 12

2.3. P ương ng iên cứu............................................................................................................... 12

2.3.1. Đối tượng nghiên cứu ................................................................................................................. 12

2.3.2 V t liệu nghiên cứu ...................................................................................................................... 12

2.2.3. Dụng cụ, hóa chất sử dụng.......................................................................................................... 13

2.3.4. Tách chiết DNA tổng số ............................................................................................................... 14

2.3.5. Tiến hành phản ứng PCR............................................................................................................. 16

2.3.6. Tinh sạch sản phẩm PCR.............................................................................................................. 18

2.3.7. P ương đọc trình t ........................................................................................................... 18

2.3.8. Xử lý số liệu ................................................................................................................................. 19

CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ................................................................................................. 20

3.1. Kết quả tách chiết DNA tổng số ..................................................................................................... 20

3.2. Kết quả nhân bản vùng gen nghiên cứu bằng kỹ thu t PCR .......................................................... 20

3.3. Phân tích kết quả............................................................................................................................ 21

3.3.1.Trình t đ ạn gen matK ............................................................................................................... 21

3.3.3. Trình t đ ạn gen trnH-psbA ...................................................................................................... 25

3.3.3. Trình t đ ạn gen ITS2................................................................................................................ 29

3.3.4. So sánh khả năng ân iệt của đ ạn trình t matK, trnH-psbA, ITS2....................................... 31

CHƯƠNG 4. KẾT UẬN VÀ KIẾN NGH .................................................................................................. 33

4.1. Kết n .......................................................................................................................................... 33

4.2. Kiến nghị......................................................................................................................................... 33

TÀI LIỆU THAM KHẢO...............................................................................................................................1

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

Các chữ viết

tắt

Nghĩa tiếng Anh Nghĩa tiếng Việt

ATP Adenosin triphosphat Adenosin triphosphat

BME β-mereaptoethanol β-mereaptoethanol

BOLD Barcode of Life data Barcode of Life data

bp Base pair Cặp base

CBOL

Consortium for the Barcode of

Life

Consortium for the Barcode

of Life

CITES

Convention on International

Trade in Endangered Species of

Wild Fauna and Flora

C ng ước về buôn bán quốc

tế các loài nguy cấp

cpDNA Chloroplast DNA bộ gen lục lạp

CTAB

Cetyl trimethylammonium

bromide

Cetyl trimethylammonium

bromide

Cytb Cytochrome b Cytochrome b

DNA (DNA) Deoxyribonucleic acid Axit deoxyribonucleic

dNTP

Deoxyribonucleotide

triphosphate

Deoxyribonucleotid

triphosphate

EBA Extraction Buffer A Đệm tách A

EBB Extraction Buffer B Đệm tách B

EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid

axit ethylenediamine

tetraacetic

F-Primer Foward-Primer Mồi xuôi

IGS Intergenic Spacer vùng liên gen

ITS Internal Transcribed Spacer

vùng DNA nằm giữa các

gen

kb Kilobase (1000 base) 1000 cặp base

mtDNA Mitochondrial DNA DNA ty thể