Nghiên Cứu Tách Chiết Flavonoid Lá Cây Diếp Cá Houttuynia Cordata Thunb

i

LỜI CẢM ƠN

Kết thúc bốn năm học tập và nghiên cứu tại Viện Công nghệ Sinh học,

trƣờng Đại học Lâm nghiệp Việt Nam, đƣợc sự cho phép của nhà trƣờng em đã

có thể tiến hành làm khóa luận với đề tài: “Nghiên cứu tách chiết flavonoid lá

cây Diếp cá Houttuynia cordata Thunb)”.

Để có thể hoàn thành tốt bài luận này không thể không kể đến sự giúp sức

của quý Thầy Cô đang công tác và giảng dạy tại Viện Công nghệ Sinh học,

trƣờng Đại học Lâm nghiệp Việt Nam, gia đình cũng nhƣ bạn bè đã ở bên, đồng

hành và ủng hộ em trong suốt quãng thời gian dài.

Lời đầu tiên, cho phép em đƣợc gửi lời biết ơn sâu sắc và chân thành nhất

đến cô giáo trực tiếp hƣớng dẫn khóa luận - Thạc sỹ Nguyễn Thị Thu Hằng

ngƣời Thầy khoa học đã định hƣớng và tận tình chỉ bảo, đã truyền đạt cho em

những kiến thức và kinh nghiệm quý báu trong cách nghĩ, các tiếp cận và cách

giải quyết vấn đề, tác phong làm việc, giúp đỡ em trong suốt thời gian thực tập

tốt nghiệp và hoàn thành khoá luận này.

Em xin phép đƣợc gửi lời cảm ơn đến các Thầy Cô giáo và chị Nguyễn

Thị Hồng Nhung của Bộ môn Công nghệ Vi sinh Hóa sinh đã hỗ trợ và tạo mọi

điều kiện về trang thiết bị, điều kiện thực nghiệm một cách tốt nhất để em có thể

hoàn thành khóa luận này.Đƣợc sự chỉ bảo tận tình của ThS. Nguyễn Thị Thu

Hằng và các Thầy Cô trong Viện cùng với sợ nỗ lực của bản thân đã cố gắng để

hoàn thiện luận văn này, song kiến thức,kinh nghiệm của em còn hạn chế ,vậy

nên bản báo cáo khoa học này không tránh đƣợc những sai sót, nhƣng mong các

thầy cô đóng góp ý kiến đánh giá, để bản báo cáo của em đƣợc hoàn thiện hơn.

Một lần nữa em xin chân thành cảm ơn!

ii

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN ........................................................................................................i

MỤC LỤC.............................................................................................................ii

DANH MỤC CÁC BẢNG...................................................................................iv

DANH MỤC CÁC HÌNH..................................................................................... v

ĐẶT VẤN ĐỀ....................................................................................................... 1

PHẦN 1 TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU........................................ 2

1.1. Giới thiệu về cây Diếp cá............................................................................... 2

1.1.1. Khái quát chung về cây Diếp cá.................................................................. 2

1.1.2. Nguồn gốc và đặc điểm thực vật................................................................. 2

1.1.3. Thành phần hóa học .................................................................................... 3

1.2. Tổng quan về flavonoid ................................................................................. 8

1.2.1. Khái niệm.................................................................................................... 8

1.2.2. Cấu trúc chung và phân loại....................................................................... 8

1.2.3. Tính chất lý hóa......................................................................................... 14

1.2.4. Tính chất sinh học của flavonoid .............................................................. 14

1.3. Tình hình nghiên cứu, ứng dụng và sản xuất các chất flavonoid ................ 17

1.3.1. Tình hình nghiên cứu, ứng dụng và sản xuất trên thế giới ....................... 17

1.3.2. Tình hình nghiên cứu, ứng dụng và sản xuất ở trong nƣớc. ..................... 17

PHẦN 2 NỘI DUNG MỤC TIÊU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU........ 18

2.1. Mục tiêu nghiên cứu..................................................................................... 18

2.2. Nội dung nghiên cứu.................................................................................... 18

2.3. Vật liệu nghiên cứu ...................................................................................... 18

2.3.1. Vật liệu thực vật ........................................................................................ 18

2.3.2. Vật liệu vi sinh vật .................................................................................... 19

2.3.3.Môi trƣờng nuôi cấy vi sinh vật................................................................. 19

2.4. Thiết bị, dụng cụ, hóa chất nghiên cứu ........................................................ 19

2.4.1 Thiết bị ....................................................................................................... 19

iii

2.4.2 Dụng cụ ...................................................................................................... 19

2.4.3 Hóa chất...................................................................................................... 20

2.5. Phƣơng pháp nghiên cứu.............................................................................. 20

2.5.1. Xác định độ ẩm của lá và tạo nguyên liệu bột lá cây Diếp Cá ................. 20

2.5.2. Xác định phƣơng pháp tách chiết.............................................................. 21

2.5.3. Xác định loại alcohol thích hợp cho quá trình tách chiết.......................... 22

2.5.4. Xác định nồng độ dung môi...................................................................... 22

2.5.5. Tách chiết hợp chất flavonoid theo phƣơng pháp trích ly ........................ 23

2.5.6. Xác định sự có mặt của flavonoid trong dịch chiết................................... 24

2.5.7. Định tính flavonoid bằng phƣơng pháp chạy sắc ký ................................ 25

2.5.8. Xác định hoạt tính kháng vi sinh vật của flavonoidchiết xuất từ lá.......... 26

PHẦN 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ............................................................. 27

3.1. Xác định độ ẩm của lá và tạo nguyên liệu bột lá Diếp cá............................ 27

3.2. Xác định phƣơng pháp tách chiết................................................................. 28

3.3 Xác định loại Alcohol thích hợp cho quá trình tách chiết ............................ 29

3.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của các yếu tố công nghệ đến khả năng trích

ly theo phƣơng pháp ngâm chiết. ........................................................................ 30

3.4.1 Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ ethanol................................. 30

3.4.2 Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của tỷ lệ nguyên liệu / dung môi ethanol 32

3.4.3 Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của thời gian chiết bằng ethanol.............. 34

3.5. Định tính các chất Flavonoid có trong nguyên liệu bằng các phản ứng hóa

học. ...................................................................................................................... 35

3.6. Định tính flavonoid bằng sắc ký lớp mỏng.................................................. 36

3.7. Khả năng kháng khuẩn của cao flavonoid chiết xuất từ lá Diếp cá............. 38

PHẦN 4 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ.............................................................. 40

4.1 Kết luận ......................................................................................................... 40

4.2 Kiến nghị....................................................................................................... 40

TÀI LIỆU THAM KHẢO

iv

DANH MỤC CÁC BẢNG

Bảng 1.1. Thành phần hóa học của cây Diếp cá ................................................... 3

Bảng 3.1. Kết quả xác định độ ẩm của lá Diếp cá .............................................. 27

Bảng 3.2 Kết quá xác định phƣơng pháp tách chiết ........................................... 28

Bảng 3.3 Kết quả đo OD của các loại Alcohol ................................................... 29

Bảng 3.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ ethanol đến hiệu suất

trích ly flavonoid ................................................................................................. 31

Bảng 3.5. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của tỷ lệ nguyên liệu / dung môi

ethanol đến hiệu suất trích ly .............................................................................. 32

Bảng 3.6. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của thời gian chiết bằng ethanol đến

hiệu suất trích ly .................................................................................................. 34

Bảng 3.7. Kết quả định tính nhóm chất flavonoid chiết xuất từ lá Diếp cá........ 36

Bảng 3.8. Hoạt tính kháng của một số chủng vi sinh vật kiểm định của dịch chiết

lá Diếp cá............................................................................................................. 39