Nghiên Cứu Nhân Giống Cây Sâm Ấn Độ Withania Somnifera Bằng Phương Pháp Nuôi Cấy In Vitro

LỜI CẢM ƠN

Để củng cố cho lý thuyết về nuôi cấy mô tế bào thực vật - một trong

những ứng dụng trong công nghệ sinh học vào thực tế, tôi đã tiến hành thực hiện

nghiên hiện nghiên cứu chuyên đề: “Nhân giống cây Sâm Ấn Độ (Withania

somnifera) bằng phương pháp nuôi cấy in vitro” để làm khóa luận tốt nghiệp.

Trong quá trình thực hiện đề tài này, để đạt đƣợc kết quả tốt, ngoài sự cố

gắng của bản thân còn có sự chỉ bảo của giúp đỡ tận tình của thầy cô, bạn bè đã

giúp tôi vƣợt qua sự khó khăn này

Để hoàn thành đề tài nghiên cứu này, tôi xin chân thành cảm ơn đến ban

lãnh đạo viện Công nghệ sinh học Lâm nghiệp, các cán bộ, thầy cô trong Viện

Công nghệ sinh học Lâm nghiệp đã tạo điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành tốt

đề tài nghiên cứu.

Đặc biệt tôi xin chân thành cảm ơn đến cô TS. Nguyễn Thị Hồng Gấm đã

tận tình hƣớng dẫn tôi ngay những ngày đầu tiên làm đề tài nghiên cứu này.

Cuối cùng xin cảm ơn đến gia đình đã động viên tinh thần, các anh chị

khóa trên, bạn bè trong Viện Công nghệ sinh học Lâm Nghiệp đã tạo điều kiện

tốt nhất để tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu này.

Hà Nội, ngày 14 tháng 5 năm 2018.

Sinh viên thực hiện

Lê Thị Cẩm Nhung.

M

LỜI CẢM ƠN

M C L C

DANH M C BẢNG CÁC TỪ VIẾT TẮT

ĐẶT VẤN ĐỀ....................................................................................................... 1

PHẦN 1. TỔNG QUAN VỀ VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU....................................... 2

1.1. Giới thiệu chung về cây Sâm Ấn Độ ............................................................. 2

1.1.1. Vị trí phân loại, nguồn gốc và phân bố....................................................... 2

1.1.2. Đặc điểm sinh học....................................................................................... 3

1.1.3. Thành phần sinh hóa và dƣợc chất.............................................................. 4

1.1.4. Tình hình nghiên cứu cây Sâm Ấn Độ trong nƣớc và trên thế giới............ 8

PHẦN 2. M C TIÊU, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU...... 12

2.1. Mục tiêu nghiên cứu..................................................................................... 12

2.2. Nội dung nghiên cứu:................................................................................... 12

2.3. Đối tƣợng nghiên cứu: ................................................................................. 12

2.4. Địa điểm và điều kiện bố trí thí nghiệm: ..................................................... 13

2.5. Phƣơng pháp nghiên cứu cụ thể:.................................................................. 13

2.5.1. Phƣơng pháp luận...................................................................................... 13

2.5.2. Phƣơng pháp bố trí thí nghiệm cụ thể....................................................... 13

2.6.. Phƣơng pháp thu thập và sử lý số liệu: ....................................................... 18

2.6.1. Phƣơng pháp thu thập số liệu:................................................................... 18

PHẦN 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .................................. 19

3.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hƣởng của thời gian khử trùng đến khả năng tạo

mẫu sạch của Sâm Ấn Độ. .................................................................................. 19

3.2. Nghiên cứu ảnh hƣởng của tổ hợp chất ĐHST đến khả năng nhân nhanh

chồi. ..................................................................................................................... 22

3.3. Nghiên cứu ảnh hƣởng của chất ĐHST đến khả năng ra rễ của chồi Sâm Ấn

Độ. ....................................................................................................................... 27

3.4. Nghiên cứu ảnh hƣởng của thời gian huấn luyện đến khả năng sống của cây

con. ...................................................................................................................... 32

3.5. Xác định thành phần ruột bầu trồng cây con Sâm Ấn Độở vƣờn ƣơm........ 34

3.6. Nghiên cứu ảnh hƣởng chế độ tƣới nƣớc đến khả năng sống, sinh trƣởng

của cây................................................................................................................. 36

3.7. Ảnh hƣởng của chế độ chiếu sáng đến sự sinh trƣởng, phát triển của cây.. 39

PHẦN 4. KẾT LUẬN - KIẾN NGHI................................................................. 42

4.1. Kết luận ........................................................................................................ 42

4.2. Kiến nghị...................................................................................................... 42

TÀI LIỆU THAM KHẢO

DANH M C BẢNG CÁC TỪ VIẾT TẮT

STT Từ viết tắt Viết đầy đủ

1 BAP Benzylamino purine-6

2 IBA Indole-3-butyric acid

3 Ki Fufuryamino purine-6

4 NAA Naphthylacetic acid

5 ĐHST Điều hòa sinh trƣởng

6 2,4D 2,4D Dichlorophenol acetic acid

7 20E 20-hydroxyecdysone

8 ABPP Achyranthes bidentata polypeptides

9 ABPS A. Bidentata polysaccharides

10 MS Murashige&Skoog, 1962

11 CTTN Công thức thí nghiệm

12 TB Trung bình

N M ẢN

Bảng 2.2: Thiết kế các thí nghiệm nhân nhanh chồi Sâm Ấn Độ....................... 15

Bảng 2.3: Thiết kế các thí nghiệm ra rễ Sâm Ấn Độ .......................................... 15

Bảng 2.4: Ảnh hƣởng của thời gian huấn luyện đến khả năng sống .................. 16

của cây Sâm Ấn Độ............................................................................................. 16

Bảng 2.5: Xác định thành phần ruột bẩu ảnh hƣởng đến khả năng .................... 17

sống của cây Sâm Ấn Độ. ................................................................................... 17

Bảng 2.6: Ảnh hƣởng của chế độ tƣới nƣớc đến khả năng phát triển của cây con.

............................................................................................................................. 17

Bảng 2.7: Ảnh hƣởng của chế độ che chắn ánh sáng đến sự sinh trƣởng của cây

con ....................................................................................................................... 18

Bảng 3.1.Ảnh hƣởng của thời gian khử trùng đến khả năng tạo mẫu sạch của

Sâm Ấn Độ. ......................................................................................................... 20

Bảng 3.2: Ảnh hƣởng của tổ hợp chất ĐHST đến khả năng nhân nhanh chồi Sâm

Ấn Độ .................................................................................................................. 23

Bảng 3.3: Ảnh hƣởng của chất ĐHST đến khả năng ra rễ tạo cây hoàn chỉnh ........ 28

Bảng 3.4: Ảnh hƣởng của thời gian huấn luyện đến khả năng sống của cây. .... 32

Bảng 3.5. Ảnh hƣởng của thành phần ruột bầu đến khả năng sống.................... 34

Bảng 3.6.Ảnh hƣởng của chế độ tƣới nƣớc đến khả năng sinh trƣởng, ............. 37

phát triển của cây................................................................................................. 37

Bảng 3.7: Ảnh hƣởng của chếđộ che sáng đến sự sinh trƣởng của cây.............. 39

N M N

Hình 1.1. Hình ảnh cây Sâm Ấn Độ [5]................................................................ 2

Hình 2.1: Hoa của Sâm Ấn Độ. ......................................................................... 7

Hình 2.2: Quả chín của Sâm Ấn Độ...................................................................... 7

Hình 2.3: Củ tƣơi của Sâm Ấn Độ ................................................................ 8

Hình 2.4: Củ khô của Sâm Ấn Độ......................................................................... 8

Hình 3.1: Tỉ lệ mẫu sạch và tỉ lệ hạt nảy mầm ở các công thức khử trùng ........ 20

Hình 3.2: Hạt Sâm Ấn Độ nảy mầm trên môi trƣờng MS sau 3 tuần nuôi cấy.. 22

Hình 3.3. Hệ số nhân chồi ở các môi trƣờng ...................................................... 23

Hình 3.4. Tỉ lệ chồi hữu hiệu ở các môi trƣờng.................................................. 24

Hình 3.5: Công thức đối chứng ....................................................................... 26

Hình 3.6: Công thức nhân chồi C1...................................................................... 25

Hình 3.7: Công thức nhân chồi C2 ................................................................ 26

Hình 3.8: Công thức nhân chồi C3...................................................................... 25

Hình 3.9: Công thức nhân chồi C4...................................................................... 26

Hình 3.10: Công thức nhân chồi C5 ................................................................. 27

Hình 3.11: Công thức nhân chồi C6.................................................................... 26

Hình 3.12: Công thức nhân chồi C7 .............................................................. 27

Hình 3.13: Công thức nhân chồi C8.................................................................... 26

Hình 3.14: Công thức nhân chồi C9.................................................................... 27

Hình 3.15: Chiều dài rễ TB ở các công thức môi trƣờng.................................... 28

Hình 3.16: Số rễ TB trên một cây ở các công thức môi trƣờng.......................... 28

Hình 3.17: Ra rễ ở công thức R1sau 4 tuần nuôi cấy. ........................................ 29

Hình 3.18.Rễ ra ở công thức R2.......................................................................... 30

Hình 3.19: Rễ ra ở công thức R3 ........................................................................ 30

Hình 3.20: Rễ ra ở công thức R5 ........................................................................ 31

Hình 3.21: Cây ra rễ ở công thức R4 và công thức R6....................................... 31

Hình 3.22:Tỉ lệ sống của cây sau 7 ngày ra bầu ................................................. 33