Nghiên Cứu Giới Hạn Phát Hiện Lod Biến Đổi Gen Trong Đậu Tương Và Các Sản Phẩm Chế Biến Từ Đậu Tương Phục Vụ Công Tác Kiểm Nghiệm

i

LỜI CẢM ƠN

Để hoàn thành khóa luận này, em xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS.

Lưu Minh Cúc và PGS.TS. Bùi Văn Thắng, những ngƣời đã tận tình hƣớng dẫn

em trong suốt quá trình thực tập và viết khóa luận tốt nghiệp.

Em xin trân trọng cảm ơn quý Thầy, Cô trong Viện Công nghệ Sinh học –

Đại học Lâm Nghiệp Việt Nam đã truyền đạt kiến thức trong những năm em học

tập. Với vốn kiến thức đƣợc tiếp thu trong quá trình học không chỉ là nền tảng

cho quá trình nghiên cứu khóa luận mà còn là hành trang quý báu để em bƣớc

vào dời một cách vững chắc và tự tin.

Em chân thành cảm ơn các anh, chị tại Phòng Giám định Sinh vật và Sản

phẩm biết đổi gen – Viện Di truyền Nông nghiệp đã giúp đỡ và tạo điều kiện

thuận lợi trong quá trình em thực tập tại đây.

Cuối cùng em kính chúc quý Thầy, Cô dồi dào sức khỏe và thành công

trong sự nghiệp nghề giáp cao quý. Đồng kích chúc cô và các anh, chị trong

Phòng Giám định Sinh vật và Sản phẩm biến đổi gen – Viện Di truyền Nông

nghiệp luôn dồi dào sức khỏe, đạt dƣợc nhiều thành công trong công việc.

n i n th n nă

Sinh viên th c hi n

Nguyễn Phúc Hưng

ii

MỤC LỤC

LỜI CẢM ƠN ........................................................................................................i

MỤC LỤC .............................................................................................................ii

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT ...............................................................................iv

DANH MỤC BẢNG............................................................................................. v

MỞ ĐẦU............................................................................................................... 1

CHƢƠNG 1. T NG QU N T I IỆU ............................................................... 3

1.1. Cây trồng biến đổi gen .................................................................................... 3

1.1.1. Khái niệm về Cây trồng biến đổi gen ......................................................... 3

1.1.2. Tình hình sản xuất và thƣơng mại hóa cây trồng biến đổi gen ................... 3

1.1.3. Những vấn đề bàn luận xung quanh sản phẩm của cây trồng biến đổi gen ..

..................................................................................................................... 5

1.1.4. Một số sự kiện liên quan đến cay trồng biến đổi gen ................................. 7

1.1.5. Vấn đề dán nhãn sản phẩm biến đổi gen ..................................................... 8

1.2. Khái quát về quy trình thí nghiệm và phƣơng pháp xác định giới hạn LOD

sản phẩm biến đổi gen ........................................................................................... 9

1.2.1. Quy trình thí nghiệm ................................................................................... 9

1.2.2. Tổng quan về phƣơng pháp tách chiết DNA dựa trên CTAB .................. 10

1.2.3. Định lƣợng và xác định độ tinh sạch của DNA ........................................ 11

1.2.4. Khái quát về giới hạn phát liện LOD (Limit of Detection) ...................... 12

1.2.5. Các phƣơng pháp điện di .......................................................................... 13

1.2.6. Các phƣơng pháp PCR.............................................................................. 13

CHƢƠNG 2.MỤC TI U, V T IỆU V PHƢƠNG PH P NGHI N CỨU.. 18

2.1. Mục tiêu ........................................................................................................ 18

2.2. Nội dung nghiên cứu .................................................................................... 18

2.3. Vật liệu ......................................................................................................... 18

2.4. Phƣơng pháp tách chiết DNA ...................................................................... 18

2.4.1. Phƣơng pháp dựa trên CTAB .................................................................... 18

2.5. Định lƣợng và kiểm tra độ tinh sạch DNA trên máy NanoDrop2000 ......... 21

iii

2.6. Định lƣợng DN đã tách chiết bằng phƣơng pháp điện di trên gel agarose21

2.6.1. Hóa chất ..................................................................................................... 21

2.6.2. Cách tiến hành ........................................................................................... 21

2.7. Realtime PCR ............................................................................................... 22

2.7.1. Thành phần phản ứng................................................................................ 22

2.7.2. Biểu thị kết quả ......................................................................................... 24

2.8. Xác định giới hạn phát hiện LOD ................................................................ 24

CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ........................................................... 26

3.1. Kết quả tách chiết DNA bằng phƣơng pháp CT B .................................... 26

3.2. Kết quả điện di kiểm tra DNA trên gel agarose 0,8% ................................. 27

3.3. Kết quả Realtime PCR và xác định giá trị LOD......................................... 28

3.3.1. Kết quả Realtime PCR xác định giá trị OD đối với nền mẫu đậu tƣơng

hạt ................................................................................................................... 28

KẾT LU N V ĐỀ NGHỊ................................................................................. 41

1. KẾT LU N ..................................................................................................... 41

2. ĐỀ NGHỊ......................................................................................................... 41

TÀI LIỆU THAM KHẢO ...................................................................................１

iv

DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT

Bp Base pair

CTAB Cetyltrimethylammonium bromide

DNA Deoxyribonucleic Acid

RNA Ribonucleic Acid

dNTP Deoxynucleotide triphosphate

EDTA Ethylenediaminetetra Acetic Acid

EtBr Ethidium Bromide

Kb Kilo base

GM Genetically Modified (Biến đổi gen)

GMCs Genetically Modified Crops (Cây trồng biến đổi gen)

GMOs Genetically Modified Organism(Sinh vật biến đổi gen)

ISAAA Cơ quan dịch vụ quốc tế và khuyến khích ứng dụng

công nghệ sinh học nông nghiệp

RNase Ribonucleasa

PCR Polymerase Chain Reaction

PVP Polyvinyl-pyrrovylidon

TBE Tris-Boric acid-EDTA

TCVN Tiêu chuẩn Quốc gia

TE Tris-EDTA

SDS Sodium decyl sulfate

UV Ultraviolet