Cấu trúc chủng nấm men Pichia Pastoris biểu hiện Mini-Proinsulin dạng tiết ra môi trường nuôi cấy

TAÏP CHÍ PHAÙT TRIEÅN KH&CN, TAÄP 15, SOÁ T1 2012

Trang 45

C4U TRÚC CHNG N4M MEN PICHIA PASTORIS BI<U HI
N MINI-PROINSULIN

D NG TIT RA MÔI TRƯ=NG NUÔI C4Y

Ngô Th3 Kim H:ng, Võ Minh Trí, Tr.n Linh Thư>c

Trưng Đi hc Khoa hc T nhiên, ĐHQG-HCM

(Bài nh
n ngày 21 tháng 03 năm 2011, hoàn chnh sa cha ngày 09 tháng 04 năm 2012)

TÓM T
T: Đái tháo ñư ng là mt trong nhng căn bnh ñang rt ñưc quan tâm hin nay.

Nh m mc ñích sn xut insulin tái t hp phc v ñiu tr bnh ñái tháo ñư ng, chúng tôi dòng hóa và

biu hin miniproinsulin trong Pichia pastoris. Đon DNA mang gen mã hóa miniproinsulin-6xHis

(MPI-6xHis) ñưc dòng hóa vào vector pPICZαA to plasmid pPICZαA/h-mpi ñ cu trúc chng P.

pastoris GS115::h-mpi biu hin MPI tái t hp dng tit ra ngoài môi trư ng. Kiu hình và kiu gen

ca P. pastoris GS115::h-mpi ñưc xác ñnh b ng PCR và c,t hn ch. MPI ñưc biu hin * dng

dung hp vi th 6xHis khi cm ng vi methanol vi n$ng ñ cu

i cùng 0,5% sau 96 gi .

T khóa: biu hin gen, Pichia pastoris, mini-proinsulin.

M Đ(U

Đái tháo ñưng (ĐTĐ) là mt trong nhng

căn b

nh ñang ñưc quan tâm hàng ñ$u hi

n

nay. B

nh ĐTĐ, chim khong 60-70% trong

các b

nh ni tit, là nguyên nhân gây t vong

ñng hàng th năm " các nưc phát tri n và

ñang tăng ñt bin " nhiu nưc ñang phát

tri n, các nưc công nghi

p mi. Hàng năm

trên th gii có khong 3,2 tri

u ngưi cht vì

b

nh ĐTĐ [4]. Ngày nay, vi

c s dng insulin

ñưc xem là mt ph$n không th thiu ñi vi

b

nh nhân mc b

nh ĐTĐ, ñ c bi

t là ĐTĐ týp

1 [6]. Vì th, vi

c sn xut insulin ngưi bng

con ñưng protein tái t& hp ñã và ñang là gii

pháp hi

u qu nht hi

n nay.

Phương pháp sn xut insulin ngưi tái t&

hp da trên mt chu8i protein (proinsulin)

thay vì 2 chu8i ñã ñưc kh3ng ñnh ưu th v

k thut và hi

u qu thu nhn insulin có hot

tính. G$n ñây, mô hình mini-proinsulin (MPI)

ñã ñưc nghiên cu vi nhiu ưu ñi m. Mini￾proinsulin có cu trúc tương t vi proinsulin,

ch khác là có ci tin thay th ñon peptide

ñ$u carboxyl (ñ$u C) t nhiên 31 amino acid

trong proinsulin bng mt ñon peptide ngn

hơn (9 amino acid), giúp d# dàng cho vi

c tinh

ch và gia tăng hi

u qu gp cun d0n ñn tăng

hi

u sut hình thành insulin có hot tính hơn

mô hình proinsulin. Đon peptide C ngn hơn

làm tăng kh năng gp cun lên 20-40% so vi

proinsulin " cùng n%ng ñ [1].

Pichia pastoris là h

thng bi u hi

n protein

ngoi lai ñang ñưc các nhà khoa hc chú ý b"i

nhng ñ c tính ưu vi

t như có th thc hi

n

nhng bin ñ&i sau dch mã, nuôi cy " mt ñ

cao to lưng sinh khi ln trong quá trình lên

men, thao tác d# dàng [3]. Ngoài ra, h

thng

P. pastoris có th sn xut lưng ln protein