Bước đầu sử dụng lectin đậu dao biển (canavalia maritima,aublet) trong định lượng kháng thể igg từ huyết thanh người

63

32(1): 63-66 T¹p chÝ Sinh häc 3-2010

B−íc ®Çu sö dông lectin ®Ëu dao biÓn (Canavalia maritima,

Aublet) trong ®Þnh l−îng kh¸ng thÓ IgG tõ huyÕt thanh ng−êi

TrÇn ThÞ Ph−¬ng Liªn, Tr−¬ng V¨n Ch©u

Tr−êng ®¹i häc S− ph¹m Hµ Néi 2

§ç V¨n Phóc, §ç Ngäc Liªn

Tr−êng ®¹i häc Khoa häc tù Nhiªn, §HQG Hµ Néi

§Ëu dao biÓn (Canavalia maritima, Aublet)

cã nguån gèc tõ Brazil, th−êng sèng ë c¸c vïng

nhiÖt ®íi ven biÓn vµ còng ®−îc liÖt kª vµo c¸c

loµi c©y ®Ëu ¨n h¹t ë c¸c vïng §«ng Nam ¸

[2, 4]. Cïng víi loµi ®Ëu rùa th−êng mäc ë rõng

nói (Canavalia ensiformis D. C.) vµ ®Ëu g−¬m

(Canavalia gladiata (Jacq) D. C.) ®I ®−îc t×m

thÊy ë ViÖt Nam [2], c¸c loµi nµy ®Òu chøa mét

lo¹i protein ®−îc gäi chung lµ lectin cã ho¹t tÝnh

ng−ng kÕt hång cÇu lµ ConA (tõ C. ensiformis),

conG (tõ C. gladiata) vµ ConM (tõ C. maritima)

[5, 6]. TÝnh chÊt ®iÓn h×nh cña lectin lµ cã kh¶

n¨ng liªn kÕt víi c¸c gèc ®−êng ®¬n vµ c¸c gèc

®−êng n»m trªn bÒ mÆt tÕ bµo [7]. øng dông

tÝnh chÊt nµy, nh÷ng n¨m cuèi cña thÕ kû XX,

c¸c nhµ khoa häc ®I sö dông lectin ®Ó nghiªn

cøu sù biÓu hiÖn kh¸ng thÓ vµ kh¸ng nguyªn. V×

vËy viÖc sö dông lectin ConM tõ h¹t ®Ëu dao

biÓn (Canavalia maritima, Aublet) ®Ó ®Þnh

l−îng kh¸ng thÓ trong huyÕt thanh ng−êi lµ ®iÒu

cÇn thiÕt cã ý nghÜa khoa häc vµ thùc tiÔn y häc.

I. ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu

1. Nguyªn liÖu

H¹t ®Ëu dao biÓn ®−îc thu h¸i t¹i khu vùc

ch©n nói Ngò Hµnh, Qu¶ng Nam §µ N½ng, do

NguyÔn §¨ng Kh«i ®Þnh lo¹i.

Hång cÇu ®−îc viÖn HuyÕt häc vµ truyÒn

m¸u Trung −¬ng cung cÊp gåm c¸c nhãm m¸u

A, B, O ®−îc röa 3 lÇn víi muèi sinh lý

(NaCl 0,9%).

C¸c mÉu huyÕt thanh ng−êi kháe b×nh

th−êng ®I ®−îc chuÈn ®o¸n l©m sµng ®−îc

ViÖn HuyÕt häc vµ TruyÒn m¸u Trung −¬ng

cung cÊp.

2. Ph−¬ng ph¸p

Tinh chÕ kh¸ng thÓ IgG tõ huyÕt thanh b»ng

cét s¾c kÝ ¸i lùc Protein A - Sepharose 4B vµ cét

ConM - Sepharose 4B tù t¹o [3].

§¸nh gi¸ møc ®é tinh s¹ch cña IgG ®I tinh

chÕ b»ng kü thuËt ®iÖn di trªn gel SDS-PAGE

theo Laemmli, víi nång ®é 12% [3].

Sö dông lectin ConM cã ®é tinh s¹ch cao tõ

h¹t ®Ëu dao biÓn ®I ®−îc tinh chÕ b»ng ph−¬ng

ph¸p s¾c kÝ ¸i lùc theo Goldstein vµ céng sù

(1986) ®Ó b−íc ®Çu ®Þnh l−îng kh¸ng thÓ IgA

trong huyÕt thanh b»ng kü thuËt LECTIN￾ELISA [3].

C¸c ho¸ chÊt sö dông cña hIng Sigma (Mü),

Merk (§øc), LKB (Thuþ §iÓn): Protein chuÈn;

Sepharose-ProteinA; SephadexG-G75; céng hîp

kh¸ng IgG; c¬ chÊt OPD, c¸c ho¸ chÊt nµy ®¹t

møc ®é tinh khiÕt cao.

II. KÕt qu¶ nghiªn cøu

1. Tinh chÕ IgG tõ huyÕt thanh ng−êi kháe

H×nh 1. §iÖn di SDS-PAGE chÕ phÈm IgG tinh s¹ch

Ghi chó: Cét 1. C¸c protein chuÈn cña hIng SIGMA;

Cét 2. IgG tinh s¹ch tinh chÕ b»ng cét ConM￾Sepharose 4B; Cét 3. IgG tinh s¹ch tinh chÕ b»ng cét

ConM-Sepharose 4B.