Biểu hiện gen HIV-1 p24 ở cây thuốc lá chuyển gen lục lạp

Science & Technology Development, Vol 15, No.T1 2012

Trang 52

BI<U HI
N GEN HIV-1 p24 CÂY THUC LÁ CHUY<N GEN L'C L P

Phan Tư0ng L c, Nguyn HBu H,, Nguyn Th3 Thanh

Vi

n Sinh hc Nhi

t ñi - Vi

n Khoa hc và Công ngh

Vi

t Nam

(Bài nh
n ngày 30 tháng 09 năm 2011, hoàn chnh sa cha ngày 09 tháng 02 năm 2012)

TÓM T
T : Chuyn gen HIV-1 p24 vào lc lp ñã ñưc thc hin thành công * cây thu

c lá V2

(Virginia TBE2). B ng các k- thu
t PCR và Southern blot, các gen chuyn ñưc chng minh ñã hòa

nh
p vào ñúng v trí thit k trên lc lp, gia gen trnfM và trnG. Kt qu Western blot cho thy gen

HIV-1 p24 biu hin * các dòng thu

c lá chuyn gen. Hàm lưng protein p24 ñưc ghi nh
n qua phân

tích ELISA cho thy tích lũy * mc cao nht là 6,3 % tng protein hòa tan (total soluble protein - TSP),

* các lá gn ng n, và thp nht là 1,7% TSP. Protein ñưc tinh sch b ng phương pháp s,c ký l c gel

phân t có ñ tinh sch là 9,694 ln, hiu sut tinh sch là 31,94%, tuy nhiên protein p24 mt hot tính

nhiu sau khi tinh sch.

T khóa: gen HIV-1 p24, cây thu

c lá V2, lc lp .

M Đ(U

Cây thuc lá V2 ñưc chuy n gen HIV-1 p24

và gen aadA vào lc lp, ch%i ñưc tái sinh trên

môi trưng có cht ñiu hòa sinh trư"ng BA 1

mg/l, NAA 0,1 mg/l và kháng sinh chn lc

spectinomycin và streptomycin " n%ng ñ ban

ñ$u tương ng là 80 mg/l và 125 mg/l. Các

ch%i chuy n gen gi ñnh s+ ñưc tip tc chn

lc " n%ng ñ cao hơn lên ti 500 mg/l. Có 4

dòng, ký hi

u T1, T2, T5, T6 có kh năng

kháng hai loi kháng sinh " n%ng ñ cao nht,

phát tri n thành cây con và ra r#. Dòng T3 ch

kháng ñưc spectinomycin " mc thp và cht

" n%ng ñ 250 mg/l. Các dòng T1, T2, T5, T6

ñã ki m tra bng PCR cho thy có s hi

n di

n

ca gen HIV-1 p24 [4], s+ ñưc tip tc phân

tích bng các k thut sinh hc phân t và sinh

hóa ñ xác ñnh di truyn các gen bin np, s

bi u hi

n protein p24 và tinh sch protein tái t&

hp.

V!T LI
U VÀ PHƯƠNG PHÁP

V9t liu

Cây thuc lá V2 (Virginia TBE2) ñã ñưc

chuy n t& hp gen Prrn/HIV-1 p24/TrbcL và

Prrn/aadA/TpsbA cu trúc trên vector

pITB.HIV-1 p24 vào lc lp bng phương pháp

bn gen. Các dòng chuy n gen nhn ñưc sau

khi chn lc và ki m tra có s hi

n di

n ca

gen HIV-1 p24 bng phương pháp PCR [4].

Sơ ñ? 1.Cu trúc vector pITB.HIV -1 p24

Prrn

TrbcL

Hiv-1 p24

TpsbA

P

aadA

rrn

trnfM

trnG